Metylacja DNA jest niezbędnym znacznikiem epigenetycznym dla rozwoju zarodka i może być podatna na czynniki środowiskowe, takie jak warunki <i>in vitro</i>. Celem tego badania była weryfikacja wpływu hodowli <i>in vitro</i> do dnia (D) 14 rozwoju na wielkość zarodka i wzorzec metylacji DNA insulinopodobnego czynnika wzrostu <i>2< /i> (<i>IGF2</i>)-wdrukowany gen.
Aby to osiągnąć, wyprodukowaliśmy zarodki bydlęce całkowicie <i>in vivo</i>, całkowicie <i>in vitro</i> i <i>in vitro</i> do D7, a następnie <i>in vivo< /i> do D14. Zarodki wyprodukowane w <i>in vitro</i> były mniejsze niż te w pozostałych dwóch grupach (<i>p</i> = 0,024) ; nie zaobserwowano różnic w wielkości zarodków między płciami. Zarodki <i>in vitro</i> wykazywały wyższy poziom metylacji DNA w <i>IGF2</i> w porównaniu z zarodkami wyprodukowanymi całkowicie <i>in vivo</i> (IVV) (<i>p</i> = 0,009).
Co więcej, zarodki męskie wyprodukowane w całości <i>in vitro</i> wykazywały wyższy poziom metylacji DNA w porównaniu z tymi obserwowanymi dla zarodków męskich całkowicie IVV (<i>p</i> = 0,034). Nie zaobserwowano różnic między płciami pod względem metylacji DNA <i>IGF2</i>. Wyniki te pokazały, że okienko między D7 i D14 ma kluczowe znaczenie dla rozwoju zarodka, a zmiany warunków środowiskowych w tym okresie mogą zaburzać proces metylacji DNA w ważnych genach z imprintem rozwojowym. Badanie to dostarcza bezprecedensowych danych dla zarodków bydlęcych dotyczących wpływu warunków środowiskowych podczas rozwoju po wykluciu.
W ramach tej pracy zbadano późniejsze płodowe i łożyskowe skutki wprowadzenia koktajlu czynników wzrostu pochodzących z macicy podczas hodowli zarodków bydlęcych.
- Oocyty bydlęce pochodzące z rzeźni dojrzewały i zapładniano in vitro. W 4 dniu po zapłodnieniu zebrano ≥ 8-komórkowe zarodki, połączono je i poddano działaniu mieszanki embriokin, zwanej EFI, która zawierała rekombinowany ludzki naskórkowy czynnik wzrostu (10 ng/ml), czynnik wzrostu fibroblastów bydlęcych-2 (10 ng/ml). ml) i ludzkim insulinopodobnym czynnikiem wzrostu 1 (50 ng/ml) lub do leczenia kontrolnego zawierającego tylko nośnik (CON). W 7. dniu poszczególne zarodki o jakości transferowej zostały przeniesione do biorców.
- Owulacja w określonym czasie została zakończona u dojrzałych, niekarmionych krów mięsnych. Krowy poddano sztucznej inseminacji (AI) lub otrzymały zarodek (ET) w 7 dniu po rui (n = 23-31 krów/leczenie w 4 powtórzeniach badań). Odsetek moruli i blastocyst stopnia 1 i 2 był wyższy (P < 0,05) dla zarodków leczonych EFI niż CON.
- Odsetek krów ciężarnych zdiagnozowanych w ultrasonografii transrektalnej nie różnił się w grupach AI i ET w 28., 42. i 56. dniu po rui. Nie stwierdzono również różnic w stosunku płodów płci męskiej do żeńskiej w 60. dniu po rui za pomocą ultrasonografii transrektalnej. W dniu 21 po rui względna liczebność trzech transkryptów genów stymulowanych interferonem (ISG) w leukocytach obwodowych nie różniła się w zależności od grupy AI/ET lub płci płodu.
- Stężenia krążącej glikoproteiny związanej z ciążą (PAG) różniły się (P < 0,05) w poszczególnych dniach. Wykryto również różnicę w stężeniach PAG (P < 0,05) między ciążami męskimi i żeńskimi w grupie CON-ET, ale nie w grupie AI lub EFI-ET.
- Na długość korony-zadu nie miała wpływu grupa AI/ET w dniu 42, ale była ona mniejsza (P < 0,05) w grupach CON i EFI-ET niż w grupie AI w dniu 56. Te wyniki sugerują, że suplementacja EFI jest środkiem do poprawy przenoszenia produkcja zarodków w systemie IVP bydła, ale nie jest jasne, czy to leczenie poprawia kompetencje zarodków po ET
Octan trenbolonu (TBA), analog testosteronu, zwiększa syntezę białek i zmniejsza degradację białek w hodowlach połączonych bydlęcych komórek satelitarnych (BSC). Jednak mechanizm, poprzez który TBA zmienia te procesy, pozostaje nieznany.
Ostatnie badania wskazują, że androgeny poprawiają tempo i zakres wzrostu mięśni poprzez mechanizm niegenomowy obejmujący receptory sprzężone z białkiem G (GPCR), metaloproteinazy macierzy (MMP), naskórkowy czynnik wzrostu wiążący heparynę (hbEGF), receptor naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) , erbB2 i receptor insulinopodobnego czynnika wzrostu-1 (IGF-1R). Postawiliśmy hipotezę, że TBA aktywuje GPCR, co skutkuje aktywacją MMP2/9, która uwalnia hbEGF, który aktywuje EGFR i/lub erbB2.
Aby ustalić, czy proponowany szlak niegenomowy jest zaangażowany w mediowane przez TBA zmiany w obrocie białkami, fuzje hodowli BSC poddano działaniu TBA w obecności lub przy braku inhibitorów GPCR, MMP2/9, hbEGF, EGFR, erbB2 lub IGF-1R, i wynikowa synteza białeki przeanalizowano wskaźniki degradacji. Testy powtórzono co najmniej 9 razy dla każdego eksperymentu z inhibitorem z wykorzystaniem hodowli BSC uzyskanych z co najmniej 3 różnych wołów, które nie były wcześniej eksponowane na związki steroidowe. Jak oczekiwano, fuzyjne hodowle BSC traktowane 10 n TBA wykazywały zwiększone (< 0,05) szybkości syntezy białka i zmniejszone (< 0,05) szybkości degradacji białka w porównaniu z hodowlami kontrolnymi. Traktowanie fuzyjnych hodowli BSC 10 n TBA w obecności inhibitorów GPCR, MMP2/9, hbEGF, EGFR, erbB2 lub IGF-1R hamowało (< 0,05) wzrost szybkości syntezy białek, w którym pośredniczy TBA. Alternatywnie, hamowanie GPCR, MMP2/9, hbEGF, EGFR, erbB2 lub IGF-1R w obecności 10 n TBA nie miało (>> 0,05) wpływu na spadki degradacji białek za pośrednictwem TBA.
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) ELISA Kit |
|||
DLR-IGF2-b-48T | DL Develop | 48T | 591.6 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) ELISA Kit |
|||
DLR-IGF2-b-96T | DL Develop | 96T | 769.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2)ELISA Kit |
|||
GA-E0057BV-48T | GenAsia Biotech | 48T | 403.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2)ELISA Kit |
|||
GA-E0057BV-96T | GenAsia Biotech | 96T | 640.8 EUR |
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine) |
|||
4-PAA051Bo01 | Cloud-Clone |
|
|
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) ELISA Kit |
|||
RDR-IGF2-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 619.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) ELISA Kit |
|||
RDR-IGF2-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 859.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) ELISA Kit |
|||
RD-IGF2-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 592.8 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) ELISA Kit |
|||
RD-IGF2-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 820.8 EUR |
Bovine Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISA Kit |
|||
QY-E60015 | Qayee Biotechnology | 96T | 511.2 EUR |
Bovine Insulin-like growth factor 1,IGF-2 ELISA Kit |
|||
CN-00482B2 | ChemNorm | 48T | 398.4 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2, Antisense (IGF2AS)ELISA Kit |
|||
GA-E0003BV-48T | GenAsia Biotech | 48T | 403.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 2, Antisense (IGF2AS)ELISA Kit |
|||
GA-E0003BV-96T | GenAsia Biotech | 96T | 640.8 EUR |
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine), APC |
|||
4-PAA051Bo01-APC | Cloud-Clone |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine), Biotinylated |
|||
4-PAA051Bo01-Biotin | Cloud-Clone |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine), Cy3 |
|||
4-PAA051Bo01-Cy3 | Cloud-Clone |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine), FITC |
|||
4-PAA051Bo01-FITC | Cloud-Clone |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine), HRP |
|||
4-PAA051Bo01-HRP | Cloud-Clone |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine), PE |
|||
4-PAA051Bo01-PE | Cloud-Clone |
|
|
Recombinant Human Insulin Like Growth Factor-2 |
|||
7-00730 | CHI Scientific | 10µg | Ask for price |
Recombinant Human Insulin Like Growth Factor-2 |
|||
7-00731 | CHI Scientific | 50µg | Ask for price |
Recombinant Human Insulin Like Growth Factor-2 |
|||
7-00732 | CHI Scientific | 1mg | Ask for price |
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx132181 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx102887 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx102888 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx102889 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx129983 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
abx117200-100ug | Abbexa | 100 ug | 560.4 EUR |
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Protein |
|||
20-abx263466 | Abbexa |
|
|
Pro-Insulin Like Growth Factor-2 Protein |
|||
20-abx262276 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
abx431352-200ul | Abbexa | 200 ul | 460.8 EUR |
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) siRNA |
|||
20-abx902624 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx172915 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx172916 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx172917 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx172918 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx172919 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx176963 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx176964 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx176965 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx176966 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx176967 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody |
|||
20-abx176968 | Abbexa |
|
|
Active Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) |
|||
4-APA051Hu01 | Cloud-Clone |
|
|
Recombinant Human Insulin Like Growth Factor-2 |
|||
CG057-010 | GenDepot | 10ug | 351.6 EUR |
Recombinant Human Insulin Like Growth Factor-2 |
|||
CG057-050 | GenDepot | 50ug | 489.6 EUR |
Recombinant Human Insulin Like Growth Factor-2 |
|||
CG057-101 | GenDepot | 1mg | 3462 EUR |
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) siRNA |
|||
20-abx920303 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) siRNA |
|||
20-abx920304 | Abbexa |
|
|
Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) |
|||
4-RPA051Hu01 | Cloud-Clone |
|
|
Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) |
|||
4-RPA051Mu01 | Cloud-Clone |
|
|
Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) |
|||
4-RPA051Ra01 | Cloud-Clone |
|
|
Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) |
|||
4-RPA051Rb01 | Cloud-Clone |
|
|
Bovine Insulin-like growth factor binding protein 2(IGFBP-2) ELISA kit |
|||
CSB-E13043B-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Bovine Insulin-like growth factor binding protein 2(IGFBP-2) ELISA kit |
|||
1-CSB-E13043B | Cusabio |
|
|
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2) ELISA Kit |
|||
DLR-IGFBP2-b-48T | DL Develop | 48T | 591.6 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2) ELISA Kit |
|||
DLR-IGFBP2-b-96T | DL Develop | 96T | 769.2 EUR |
Bovine IGFBP2/ Insulin-like growth factor-binding protein 2 ELISA Kit |
|||
E0138Bo | Sunlong | 1 Kit | 614.4 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2)ELISA Kit |
|||
GA-E0059BV-48T | GenAsia Biotech | 48T | 403.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2)ELISA Kit |
|||
GA-E0059BV-96T | GenAsia Biotech | 96T | 640.8 EUR |
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Polyclonal Antibody (Bovine), APC-Cy7 |
|||
4-PAA051Bo01-APC-Cy7 | Cloud-Clone |
|
|
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2) ELISA Kit |
|||
RDR-IGFBP2-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 619.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2) ELISA Kit |
|||
RDR-IGFBP2-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 859.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2) ELISA Kit |
|||
RD-IGFBP2-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 592.8 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor Binding Protein 2 (IGFBP2) ELISA Kit |
|||
RD-IGFBP2-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 820.8 EUR |
Bovine Insulin-like growth factor II(IGF2) ELISA kit |
|||
CSB-EL011088BO-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Bovine Insulin-like growth factor II(IGF2) ELISA kit |
|||
1-CSB-EL011088BO | Cusabio |
|
|
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) ELISA Kit |
|||
DLR-IGF1-b-48T | DL Develop | 48T | 591.6 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) ELISA Kit |
|||
DLR-IGF1-b-96T | DL Develop | 96T | 769.2 EUR |
Bovine IGF1/ Insulin-like growth factor I ELISA Kit |
|||
E0135Bo | Sunlong | 1 Kit | 860.4 EUR |
Bovine IGF2/ Insulin-like growth factor II ELISA Kit |
|||
E0137Bo | Sunlong | 1 Kit | 860.4 EUR |
ELISA kit for Bovine Insulin-like growth factor II |
|||
EK1132 | SAB | 96 tests | 804 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1)ELISA Kit |
|||
GA-E0056BV-48T | GenAsia Biotech | 48T | 403.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1)ELISA Kit |
|||
GA-E0056BV-96T | GenAsia Biotech | 96T | 640.8 EUR |
Bovine Insulin like growth factor I, IGF1 ELISA Kit |
|||
ELA-E0050b | Lifescience Market | 96 Tests | 1113.6 EUR |
Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) Polyclonal Antibody (Bovine) |
|||
4-PAA050Bo01 | Cloud-Clone |
|
|
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 ELISA Kit (IGF1) |
|||
RK00469 | Abclonal | 96 Tests | 625.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) ELISA Kit |
|||
RDR-IGF1-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 619.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) ELISA Kit |
|||
RDR-IGF1-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 859.2 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) ELISA Kit |
|||
RD-IGF1-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 592.8 EUR |
Bovine Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1) ELISA Kit |
|||
RD-IGF1-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 820.8 EUR |
IGF1 Human, Insulin-Like Growth Factor 1 Human Recombinant Protein, GST Tag |
|||
PROTP01343-2 | BosterBio | Regular: 5ug | 574.8 EUR |
Rat Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Protein |
|||
20-abx167743 | Abbexa |
|
|
Human Insulin Like Growth Factor (IGF-2) Protein |
|||
abx061559-100ug | Abbexa | 100 ug | 1178.4 EUR |
Human Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Protein |
|||
20-abx067232 | Abbexa |
|
|
Mouse Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Protein |
|||
20-abx067233 | Abbexa |
|
|
Rat Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Protein |
|||
20-abx067234 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 Receptor (IGF2R) Antibody |
|||
20-abx104018 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 Receptor (IGF2R) Antibody |
|||
20-abx104019 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 Receptor (IGF2R) Antibody |
|||
20-abx104020 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 Receptor (IGF2R) Antibody |
|||
abx038272-100ug | Abbexa | 100 ug | 469.2 EUR |
Insulin Like Growth Factor 2 Receptor (IGF2R) Antibody |
|||
20-abx123245 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 Receptor (IGF2R) Antibody |
|||
20-abx125346 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 Receptor (IGF2R) Antibody |
|||
20-abx113166 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody (FITC) |
|||
20-abx273858 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody (FITC) |
|||
20-abx274043 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody (FITC) |
|||
20-abx274172 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody (Biotin) |
|||
20-abx272645 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody (Biotin) |
|||
20-abx273130 | Abbexa |
|
|
Insulin Like Growth Factor 2 (IGF2) Antibody (Biotin) |
|||
20-abx271902 | Abbexa |
|
|
Jednak hamowanie zarówno EGFR, jak i erbB2 w obecności 10 n TBA skutkowało zmniejszoną (< 0,05) zdolnością TBA do zmniejszania szybkości degradacji białka. Dodatkowo, fuzyjne hodowle BSC traktowane 10 n TBA wykazują zwiększone (< 0,05) poziomy białka pAKT. Dane te wskazują, że wzrost syntezy białek, w którym pośredniczy TBA, prawdopodobnie obejmuje GPCR, MMP2/9, hbEGF, EGFR, erbB2 i IGF-1R. Jednak mechanizm, poprzez który TBA pośredniczy w zmianach w degradacji białka, jest inny i wydaje się obejmować tylko EGFR i erbB2. Co więcej, wydaje się, że szlak kinazy białkowej B jest zaangażowany w wpływ TBA na fuzyjne hodowle BSC.