Ginsenozyd Rg3 promuje apoptozę komórek HeLa poprzez regulację autofagii

    • 20( S )-ginsenozyd Rg3 (GRg3) ma różne bioaktywności, w tym działanie przeciwnowotworowe i hamowanie autofagii. Jednak żadne doniesienia nie badały pojawienia się autofagii lub związku między autofagią a apoptozą w komórkach HeLa traktowanych 20( S )-GRg3. Żywotność komórek mierzono za pomocą testów CCK-8 (  zestaw do liczenia komórek -8).
    • Apoptozę i cykl komórkowy analizowano za pomocą  barwienia Hoechst 33342  i cytometrii przepływowej. Ścieżki apoptotyczne zbadano za pomocą oznaczania ROS (reaktywnych form tlenu) i testów rodaminy 123.
    • Do określenia zmian w poziomach białka zastosowano analizę Western blot. Indukcję autofagii monitorowano przez kwasowe  barwienie organelli pęcherzykowych  i transfekcję EGFP-LC3. 20 S )-GRg3 hamowało autofagię komórek w stanie głodu, uniemożliwiając komórkom utrzymanie  stanu stacjonarnego  poprzez autofagię, a następnie indukowanie apoptozy. 20( S )-GRg3 zablokowało późny etap autofagii (fuzja lizosomów i degradacja lizosomów autofagicznych), w tym zmniejszenie kwaśnej fluorescencji organelli pęcherzykowych, zwiększenie konwersji LC3 I-II, akumulację fluorescencji EGFP-LC3, GFP-mRFP-
    • Stosunek czerwono-zielonej fluorescencji LC3, degradacja substratu p62 i utrata równowagi między autofagią a apoptozą, która indukowała apoptozę.  Wzrost ROS, spadek potencjału błony mitochondrialnej  , induktor apoptozy
    • AIF został uwolniony z mitochondriów i nastąpił transfer jądra, wywołując serię kolejnych zdarzeń apoptotycznych. Induktor autofagii rapamycyna hamował apoptozę indukowaną przez 20( S )-GRg3, podczas gdy inhibitor autofagii BA1 promował apoptozę indukowaną przez 20( S )-GRg3.
    • Zatem 20( S )-GRg3 promowało apoptozę komórek HeLa poprzez regulację autofagii. W stanie autofagicznym 20( S )-GRg3 może być stosowany jako nowy inhibitor autofagii w synergii z terapiami blokującymi nowotwór, takimi jak chemioterapia, co wspiera jego zastosowanie w medycynie.

    Lenalidomid stabilizuje receptor erytropoetyny poprzez hamowanie ligazy ubikwityny E3 RNF41.

    • W podgrupie pacjentów z zespołem mielodysplastycznym (MDS) innym niż del(5q) lenalidomid promuje kompetencje linii erytroidalnej i skuteczną erytropoezę.
    • Aby określić mechanizm, za pomocą którego lenalidomid promuje erytropoezę, zbadaliśmy jego działanie na dynamikę komórkową receptora erytropoetyny (EpoR) . Lenalidomid regulował w górę ekspresję i stabilność EpoR związanego z JAK2 w komórkach erytroidalnych UT7 i pierwotnych komórkach progenitorowych CD71+. Wpływ lenalidomidu na obrót receptora był specyficzny dla receptora cytokin typu I, o czym świadczy współregulacja receptora IL3-Rα, ale nie c- Kit .
    • Aby wyjaśnić ten mechanizm, zbadaliśmy wpływ lenalidomidu na ligazę ubikwityny E3 RNF41. Lenalidomid promował asocjację EpoR/RNF41 i hamował autoubikwitynację RNF41, której towarzyszyło zmniejszenie ubikwitynacji EpoR.
    • Aby potwierdzić, że RNF41 jest głównym celem odpowiedzialnym za stabilizację EpoR, komórki HEK293T transfekowano wektorami ekspresyjnymi genu EpoR i/lub RNF41. Ekspresja EpoR w stanie stacjonarnym została zmniejszona w komórkach EpoR/RNF41, podczas gdy regulacja w górę EpoR przez lenalidomid została zniesiona, co wskazuje, że komórkowy RNF41 jest krytycznym wyznacznikiem modulacji receptora indukowanego lekiem.
    • Warto zauważyć, że supresja ekspresji genu CRBN przez shRNA nie zmieniła regulacji w górę EpoR, co wskazuje, że indukowana lekami modulacja receptora jest niezależna od cereblonu. Barwienie immunohistochemiczne   wykazało, że ekspresja RNF41 zmniejszyła się w pierwotnych komórkach erytroidalnych pacjentów odpowiadających na lenalidomid, co sugeruje, że ekspresja komórkowego RNF41 zasługuje na zbadanie jako biomarkera odpowiedzi na lenalidomid.
    • Nasze odkrycia wskazują, że lenalidomid ma działanie hamujące ligazę ubikwitynową E3, które rozciąga się na RNF41 i że hamowanie autoubikwitynacji RNF41 sprzyja  akumulacji w błonie kompetentnych kompleksów JAK2/EpoR sygnalizujących, które zwiększają odpowiedź Epo.

    Ocena i interpretacja żywotności bakterii przy użyciu zestawu LIVE/DEAD BacLight  Kit  w połączeniu z cytometrią przepływową.

    1. Dostępny na rynku zestaw LIVE/DEAD BacLight  cieszy się coraz większą popularnością wśród badaczy z różnych dziedzin mikrobiologii. Jego zastosowanie w połączeniu z cytometrią przepływową wywołało nowe pytania dotyczące interpretacji  wyników barwienia LIVE/DEAD. Stany pośrednie, zwykle trudne do wykrycia za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej, są powszechnym zjawiskiem, gdy test jest używany w cytometrii przepływowej i nadal nie mają uzasadnienia
    2. Pokazano tutaj, że zastosowanie jodku propidyny w połączeniu z zielonym fluorescencyjnym barwnikiem całkowitego kwasu nukleinowego na napromieniowane UVA komórki Escherichia coli, Salmonella enterica serovar Typhimurium, Shigella flexneri oraz środowisko bakterii słodkowodnych dały wyraźny i charakterystyczny  wzór barwienia cytometrii przepływowej  .
    3. W przypadku Gram-ujemnej bakterii E. coli, jak również w przypadku dwóch patogenów jelitowych, wzorzec ten może być związany z obecnością pośrednich stanów komórkowych charakteryzujących się stopniem uszkodzenia wywoływanego specyficznie na zewnętrznej  błonie bakterii .
    4. Hipotezę tę potwierdza fakt, że nienapromieniowane komórki poddane działaniu EDTA wykazują te same   właściwości barwienia . Wręcz przeciwnie, tego wzoru nie zaobserwowano w gram-dodatnich Enterococcus faecalis, które nie mają zewnętrznej  błony . Nasze obserwacje dodają nowy aspekt do barwienia LIVE/DEAD, które do tej pory uważano za zależne tylko od   przepuszczalności błony cytoplazmatycznej.

    LIVE/DEAD BacLight : zastosowanie nowej metody szybkiego  barwienia  do bezpośredniego oznaczania liczby żywych i wszystkich bakterii w wodzie pitnej.

    • Zastosowano szybką  metodę barwienia epifluorescencyjnego  przy użyciu zestawu LIVE/DEAD Bacterial Viability  Kit  (BacLight), aby oszacować zarówno żywotne, jak i całkowitą liczbę bakterii w wodzie pitnej. BacLight składa się z dwóch barwników wiążących kwasy nukleinowe: SYTO 9 i jodku propidyny. SYTO 9 penetruje wszystkie  błony bakteryjne  i barwi komórki na zielono, podczas gdy jodek propidyny penetruje tylko komórki z uszkodzonymi  błonami , a połączenie tych dwóch barwników daje czerwone fluoryzujące komórki.
    • Stwierdzono, że optymalne warunki inkubacji to 15 do 20 min, w temperaturze pokojowej w ciemności. Całkowite (czerwone + zielone) i żywotne (zielone) komórki mogą być zatem liczone jednocześnie. Zbadano czynniki wpływające na  procedurę barwienia  (dodatek aldehydu glutarowego,  czas barwienia  , wpływ chloru). W przypadku braku stresu, liczby żywych bakterii BacLight były porównywalne z liczbą 5-cyjano-2,3-ditolilotetrazoliową (CTC).
    • Całkowite zliczenia BacLight były porównywalne ze zliczeniami pomarańczy akrydyny (różniące się o <0,1 log/ml). Jednak wzrost stresów środowiskowych (chlor, tempo wzrostu lub temperatura) wywołał spadek żywotności, który był bardziej wyraźny w przypadku liczby żywych CTC i płytek niż w przypadku liczby żywych komórek BacLight.

    C – kit  immunopozytywne komórki śródmiąższowe (typu Cajal) w ludzkim myometrium.

    • Poprzednie doniesienia opisujące podobne do Cajala komórki śródmiąższowe w ludzkiej macicy są sprzeczne pod względem immunoreaktywności c- kit  : albo ujemna (ale wimentyno-dodatnia) w ciężarnej myometrium, albo dodatnia, przypuszczalnie w endometrium.
    • Celem tego badania była weryfikacja istnienia ludzkich komórek śródmiąższowych podobnych do Cajala w myometrium (m-CLIC). Zastosowano sześć różnych, uzupełniających się podejść: 1) barwienie  próbek tkanek przy  życiu błękitem metylenowym (kriosekcje  ), 2) barwienie przyżyciowe błękitem metylenowym i zielenią Janus B  (odpowiednio markery m-CLIC i mitochondrialne) oraz 3) pojedyncza jednostka zewnątrzkomórkowa zapisy elektrofizjologiczne w hodowlach komórkowych, 4) niekonwencjonalna mikroskopia świetlna na utrwalonym aldehydzie glutarowym/osm,
    • Zatopione w Epon półcienkie skrawki (mniej niż 1 mikrom) barwione błękitem toluidynowym (TSM), 5) transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM) i 6) immunofluorescencja (IF). Znaleźliśmy m-CLIC w krioskracjach myometrium oraz w hodowlach komórkowych. In vitro m-CLIC stanowił około 7% całkowitej liczby komórek. m-CLIC miał 2-3 charakterystyczne wyrostki, które były bardzo długie (około 60 mikrometrów), bardzo cienkie (< lub =0,5 mikrometra) i jednokształtne.
    • Rozszerzone fragmenty procesów zwykle mieściły mitochondria. In vitro, m-CLIC wykazywał spontaniczną aktywność elektryczną (62,4 +/- 7,22 mV  potencjałów błonowych  , krótki czas trwania: 1,197 +/- 0,04 ms). Ponadto m-CLIC spełniał zwykłe kryteria TEM, tzw. standardy „złote” lub „platynowe” (np. obecność nieciągłej blaszki podstawnej, kaweoli, retikulum endoplazmatycznego oraz bliski kontakt między sobą, z miocytami, włóknami nerwowymi i /lub kapilary itp.).

     

    Petaka Basic Kit (LOT)

    PET40B-LOT Neuromics 10 PetakaG3, 4 stands and 40 tips 336 EUR

    PetakaG3 LOT Culture Devices

    Petaka-LOT Neuromics 300 Petaka Devices 10164 EUR

    Recombinant other Pfu DNA Polymerase Protein, Untagged, E.coli-500U

    QP13023-500U EnQuireBio 500U 300 EUR

    SINGLE BLOCK, 20 X 2.0ML TUBES

    480117 CORNING 1/pk 117 EUR

    SINGLE BLOCK, 20 X 10MM TUBES

    480121 CORNING 1/pk 108 EUR

    SINGLE BLOCK, 20 X 12MM TUBES

    480122 CORNING 1/pk 108 EUR

    SINGLE BLOCK, 20 X 13MM TUBES

    480123 CORNING 1/pk 108 EUR

    Taq DNA Polymerase (500U)

    9K-001-0001 Bio Basic 500U 174.41 EUR

    99445-20 DCT 20 X 150MM

    99445-20 CORNING 250/pk 119 EUR

    Fast-Taq DNA Polymerase (500U)

    9K-001-0036 Bio Basic 500U 350.54 EUR

    20 x ELISA Wash Buffer

    GR103014-20 Genorise Scientific 1 L 158 EUR

    Recombinant other Aminopeptidase Protein, Untagged, Native Protein-500U

    QP10519-500U EnQuireBio 500U 481 EUR

    Recombinant Porcine Thrombin Protein, Untagged, Native Protein-500U

    QP10878-500U EnQuireBio 500U 363 EUR

    Block, 20 x 12mm or 13mm test tubes

    BCM1412-BSW13 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    99447 DSSCT 20 X 125 W/ MARKING SPOT

    99447-20 CORNING 250/pk 211 EUR

    Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (500U)

    9K-001-0031 Bio Basic 500U 292.73 EUR

    utiDNA Polymerase w/ dNTPs

    FYT007-500U Yeastern Biotech 500 Units Ask for price

    HiFi DNA Polymerase wiodNTP

    FYT033-500U Yeastern Biotech 500U Ask for price

    Accu DNA Polymerase wiodNTPs

    FYT044-500U Yeastern Biotech 500U Ask for price

    T DNA Polymerase Enzyme

    abx071008-500U Abbexa 500 U 217 EUR

    TopTaq DNA Polymerase Enzyme

    abx071014-500U Abbexa 500 U 300 EUR

    EasyPfu DNA Polymerase Enzyme

    abx071016-500U Abbexa 500 U 217 EUR

    FastPfu DNA Polymerase Enzyme

    abx071018-500U Abbexa 500 U 314 EUR

    Pfu DNA Polymerase (Recombinant)

    abx074017-500U Abbexa 500 U 439 EUR

    99449 DSSCT 20 X 125MM W/O MARKING SPOT

    99449-20 CORNING 250/pk 228 EUR

    HiFi DNA Polymerase wi dNTP

    FYT003-500U Yeastern Biotech 500U Ask for price

    Accu DNA Polymerase wi dNTPs

    FYT004-500U Yeastern Biotech 500U Ask for price

    YEA taq DNA Polymerase wiodNTP

    FYT011-500U Yeastern Biotech 500U Ask for price

    utiDNA Polymerase w/o dNTPs

    FYT077-500U Yeastern Biotech 500 Units Ask for price

    DNA Polymerase Enzyme (4 kb)

    abx071004-500U Abbexa 500 U 175 EUR

    DNA Polymerase Enzyme (15 kb)

    abx071012-500U Abbexa 500 U 272 EUR

    FastPfu Fly DNA Polymerase Enzyme

    abx071020-500U Abbexa 500 U 356 EUR

    Pfu DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (500U)

    9K-001-0009 Bio Basic 500U 572 EUR

    YEA taq DNA Polymerase wi dNTP

    FYT001-500U Yeastern Biotech 500U Ask for price

    DNA Polymerase (6 kb / min) Enzyme

    abx071002-500U Abbexa 500 U 189 EUR

    DNA Polymerase High Fidelity (HiFi) Enzyme

    abx071010-500U Abbexa 500 U 244 EUR

    Flip-Block, 24 x 1.5ml tubes, or 32 x 0.2ml and 14 x 0.5ml tubes

    BCM1412-BSWCMB Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 242.41 EUR

    AXYGEN® GEL TRAY 20 X 20 CM FOR USE WITH 20 CM GEL BOX, UV TRANSPARENT

    HGB20-20-GT CORNING 1/pk 97 EUR

    .5ML CONICAL BOTTOM AMBER SCREW CAP TUBES WITHOUT CAPS

    ST-050-X CORNING 500/pk 222 EUR

    1.5ML CONICAL BOTTOM SCREW CAP TUBES WITHOUT CAP. AMBER

    ST-150-X CORNING 500/pk 221 EUR

    2.0ML AMBER CONICAL BOTTOM SCREW CAP TUBES WITHOUT CAPS

    ST-200-X CORNING 500/pk 221 EUR

    TopTaqDNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) Enzyme

    abx071015-500U Abbexa 500 U 300 EUR

    Fast-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (500U)

    9K-001-0003 Bio Basic 500U 479.35 EUR

    T DNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) Enzyme

    abx071009-500U Abbexa 500 U 230 EUR

    EasyPfu DNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) Enzyme

    abx071017-500U Abbexa 500 U 230 EUR

    FastPfu DNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) Enzyme

    abx071019-500U Abbexa 500 U 328 EUR

    Gel Tray 20 X 20 Cm

    LE1000GT-06 GenDepot Ea 188 EUR

    SINGLE BLOCK, 24 X 0.5ML TUBES

    480118 CORNING 1/pk 114 EUR

    SINGLE BLOCK, 24 X 1.5ML TUBES

    480119 CORNING 1/pk 114 EUR

    SINGLE BLOCK, 35 X 6MM TUBES

    480120 CORNING 1/pk 114 EUR

    SINGLE BLOCK, 12 X 16MM TUBES

    480125 CORNING 1/pk 114 EUR

    SINGLE BLOCK, 12 X 17MM TUBES

    480126 CORNING 1/pk 108 EUR

    SINGLE BLOCK, 6 X 20MM TUBES

    480127 CORNING 1/pk 108 EUR

    SINGLE BLOCK, 6 X 25MM TUBES

    480128 CORNING 1/pk 108 EUR

    Block, 24 x 0.5ml centrifuge tubes

    BCM1405-B05 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 162.3 EUR

    Block, 4 x 15ml centrifuge tubes

    BCM1405-B150 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 189.41 EUR

    Block, 2 x 50ml centrifuge tubes

    BCM1405-B500 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 189.41 EUR

    Block, 24 x 0.5ml centrifuge tubes

    BCM1412-BSW05 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    Block, 12 x 15ml centrifuge tubes

    BCM1412-BSW15 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    Block, 5 x 50ml centrifuge tubes

    BCM1412-BSW50 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    PetakaG3 LOT Shipping Kit

    PETLSK Neuromics 10 PetakaG3, 4 stands, 100 tips, and 10 mailers 1029 EUR

    PetakaG3 LOT Trial Kit

    TraiLTD Neuromics 50 Petakas, 6 stands and 100 tips 1844 EUR

    DNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) (4 kb) Enzyme

    abx071003-500U Abbexa 500 U 203 EUR

    DNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) (15 kb) Enzyme

    abx071013-500U Abbexa 500 U 272 EUR

    FastPfu Fly DNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) Enzyme

    abx071021-500U Abbexa 500 U 370 EUR

    DNA Polymerase High Fidelity (HiFi) (with 2.5 mM dNTPs) Enzyme

    abx071011-500U Abbexa 500 U 258 EUR

    20 x Sample Diluents

    GR103058 Genorise Scientific 100 mL 70 EUR

    DNA Polymerase (with 2.5 mM dNTPs) (1-2 kb / min) Enzyme

    abx071005-500U Abbexa 500 U 189 EUR

    Araloside X

    N2222-20 ApexBio 20 mg 282 EUR

    SINGLE BLOCK, 12 X 15ML CENTRIFUGE TUBES

    480124 CORNING 1/pk 114 EUR

    SINGLE BLOCK, 5 X 50ML CENTRIFUGE TUBES

    480129 CORNING 1/pk 114 EUR

    Block, 15 x HPLC or Cryovial tubes

    BCM1405-B1232 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 162.3 EUR

    20(S)-NotoginsenosideR2

    N2028-20 ApexBio 20 mg 630 EUR

    0.5ML CONICAL BOTTOM SCREW CAP TUBES WITHOUT CAPS (SELF STANDING). AMBER

    ST-050-SS-X CORNING 500/pk 222 EUR

    1.5ML CONICAL BOTTOM SCREW CAP TUBES WITHOUT CAPS (SELF STANDING) AMBER

    ST-150-SS-X CORNING 500/pk 221 EUR

    2.0ML CONICAL BOTTOM SCREW CAP TUBES WITHOUT CAPS. AMBER. SELF STANDING

    ST-200-SS-X CORNING 500/pk 221 EUR

    Genorise® 20 x SSC

    GR102012 Genorise Scientific 1 L 203 EUR

    20 x PBS, pH 7.30

    GR103004x20 Genorise Scientific 1 L 135 EUR

    20 x Synovial Fluid Solution

    GR103059 Genorise Scientific 100 mL 70 EUR

    Mini gel tubes, 7 x 2.5 x 75 mm, 8/pk

    2394122 Atto 6unit 263 EUR

    Mini gel tubes, 7 x 2.5 x 100 mm, 8/pk

    2394132 Atto 6unit 273 EUR

    20(R)Ginsenoside?Rh1

    N2192-20 ApexBio 20 mg 514 EUR

    20(R)Ginsenoside Rg2

    N2195-20 ApexBio 20 mg 224 EUR

    20(R)Ginsenoside Rg3

    N2198-20 ApexBio 20 mg 514 EUR

    FGF-20, human recombinant

    4589-20 Biovision 277 EUR

    Block, 40 x 0.2ml tubes or 5 PCR strips of 8 tubes each

    BCM1405-B02 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 162.3 EUR

    Block, 48 x 0.2ml tubes or 6 PCR strips of 8 tubes each

    BCM1412-BSW02 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    PCR-Tubes 0,2 ml in strips; 8 x 250 tubes with domed caps

    A23232 GeneOn 8x250 tubes&caps 120 EUR

    COOLRACK 96X0.5ML, FOR 96 X 0.5ML 2D TUBES

    432056 CORNING 1/pk 421 EUR

    COOLRACK 96X1ML, FOR 96 X 1.4ML 2D TUBES

    432057 CORNING 1/pk 386 EUR

    Block, 6 x 5ml centrifuge tubes (17mm diameter)

    BCM1405-B5MT Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 189.41 EUR

    Block, 12 x 15mm or 16mm test tubes

    BCM1412-BSW1516 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    Block, 24 x 1.5ml or 2.0ml centrifuge tubes

    BCM1412-BSW1520 Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    Block, 12 x 5.0ml centrifuge tubes (17mm diameter)

    BCM1412-BSW5MT Bio Basic 1 pcs, 1 UNIT 194.34 EUR

    Work Station Rack for 50 x 5ml tubes

    C1005-T5-RK2 Benchmark Scientific 1 PC 94 EUR

    Tube Holder for 5ml tubes (2 x 5ml)

    D1036-A5 Benchmark Scientific 1 PC 158.09 EUR

    Lipase A >500U/g

    L6881 Bio Basic 1G 89.15 EUR

    rHu IL 2 , 3MIU , Lot 200908F02

    04-RHIL2-08F02 Gentaur Genprice 1 vial 249 EUR

    CB20A 20 x 20 cm Filter Paper 100/pk

    2392493 Atto 2unit 351 EUR

    BIO-X-ACT Short DNA Polymerase

    BIO-21065 Bioline 500 Units Ask for price

    IF wykazał, że m-CLIC wyraża CD117/c- kit , czasami związany z CD34, z wimentyną w swoich procesach. Podsumowując, opisujemy komórki śródmiąższowe podobne do Cajala w myometrium, które wykazują powinowactwo do barwników przyżyciowych: błękit metylenowy i zieleń Janus B, spełniają (wszystkie) kryteria TEM, wykazują ekspresję CD117/c – kit  i wykazują spontaniczną aktywność elektryczną.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.