-
- 20( S )-ginsenozyd Rg3 (GRg3) ma różne bioaktywności, w tym działanie przeciwnowotworowe i hamowanie autofagii. Jednak żadne doniesienia nie badały pojawienia się autofagii lub związku między autofagią a apoptozą w komórkach HeLa traktowanych 20( S )-GRg3. Żywotność komórek mierzono za pomocą testów CCK-8 ( zestaw do liczenia komórek -8).
- Apoptozę i cykl komórkowy analizowano za pomocą barwienia Hoechst 33342 i cytometrii przepływowej. Ścieżki apoptotyczne zbadano za pomocą oznaczania ROS (reaktywnych form tlenu) i testów rodaminy 123.
- Do określenia zmian w poziomach białka zastosowano analizę Western blot. Indukcję autofagii monitorowano przez kwasowe barwienie organelli pęcherzykowych i transfekcję EGFP-LC3. 20 ( S )-GRg3 hamowało autofagię komórek w stanie głodu, uniemożliwiając komórkom utrzymanie stanu stacjonarnego poprzez autofagię, a następnie indukowanie apoptozy. 20( S )-GRg3 zablokowało późny etap autofagii (fuzja lizosomów i degradacja lizosomów autofagicznych), w tym zmniejszenie kwaśnej fluorescencji organelli pęcherzykowych, zwiększenie konwersji LC3 I-II, akumulację fluorescencji EGFP-LC3, GFP-mRFP-
- Stosunek czerwono-zielonej fluorescencji LC3, degradacja substratu p62 i utrata równowagi między autofagią a apoptozą, która indukowała apoptozę. Wzrost ROS, spadek potencjału błony mitochondrialnej , induktor apoptozy
- AIF został uwolniony z mitochondriów i nastąpił transfer jądra, wywołując serię kolejnych zdarzeń apoptotycznych. Induktor autofagii rapamycyna hamował apoptozę indukowaną przez 20( S )-GRg3, podczas gdy inhibitor autofagii BA1 promował apoptozę indukowaną przez 20( S )-GRg3.
- Zatem 20( S )-GRg3 promowało apoptozę komórek HeLa poprzez regulację autofagii. W stanie autofagicznym 20( S )-GRg3 może być stosowany jako nowy inhibitor autofagii w synergii z terapiami blokującymi nowotwór, takimi jak chemioterapia, co wspiera jego zastosowanie w medycynie.
Lenalidomid stabilizuje receptor erytropoetyny poprzez hamowanie ligazy ubikwityny E3 RNF41.
- W podgrupie pacjentów z zespołem mielodysplastycznym (MDS) innym niż del(5q) lenalidomid promuje kompetencje linii erytroidalnej i skuteczną erytropoezę.
- Aby określić mechanizm, za pomocą którego lenalidomid promuje erytropoezę, zbadaliśmy jego działanie na dynamikę komórkową receptora erytropoetyny (EpoR) . Lenalidomid regulował w górę ekspresję i stabilność EpoR związanego z JAK2 w komórkach erytroidalnych UT7 i pierwotnych komórkach progenitorowych CD71+. Wpływ lenalidomidu na obrót receptora był specyficzny dla receptora cytokin typu I, o czym świadczy współregulacja receptora IL3-Rα, ale nie c- Kit .
- Aby wyjaśnić ten mechanizm, zbadaliśmy wpływ lenalidomidu na ligazę ubikwityny E3 RNF41. Lenalidomid promował asocjację EpoR/RNF41 i hamował autoubikwitynację RNF41, której towarzyszyło zmniejszenie ubikwitynacji EpoR.
- Aby potwierdzić, że RNF41 jest głównym celem odpowiedzialnym za stabilizację EpoR, komórki HEK293T transfekowano wektorami ekspresyjnymi genu EpoR i/lub RNF41. Ekspresja EpoR w stanie stacjonarnym została zmniejszona w komórkach EpoR/RNF41, podczas gdy regulacja w górę EpoR przez lenalidomid została zniesiona, co wskazuje, że komórkowy RNF41 jest krytycznym wyznacznikiem modulacji receptora indukowanego lekiem.
- Warto zauważyć, że supresja ekspresji genu CRBN przez shRNA nie zmieniła regulacji w górę EpoR, co wskazuje, że indukowana lekami modulacja receptora jest niezależna od cereblonu. Barwienie immunohistochemiczne wykazało, że ekspresja RNF41 zmniejszyła się w pierwotnych komórkach erytroidalnych pacjentów odpowiadających na lenalidomid, co sugeruje, że ekspresja komórkowego RNF41 zasługuje na zbadanie jako biomarkera odpowiedzi na lenalidomid.
- Nasze odkrycia wskazują, że lenalidomid ma działanie hamujące ligazę ubikwitynową E3, które rozciąga się na RNF41 i że hamowanie autoubikwitynacji RNF41 sprzyja akumulacji w błonie kompetentnych kompleksów JAK2/EpoR sygnalizujących, które zwiększają odpowiedź Epo.
Ocena i interpretacja żywotności bakterii przy użyciu zestawu LIVE/DEAD BacLight Kit w połączeniu z cytometrią przepływową.
- Dostępny na rynku zestaw LIVE/DEAD BacLight cieszy się coraz większą popularnością wśród badaczy z różnych dziedzin mikrobiologii. Jego zastosowanie w połączeniu z cytometrią przepływową wywołało nowe pytania dotyczące interpretacji wyników barwienia LIVE/DEAD. Stany pośrednie, zwykle trudne do wykrycia za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej, są powszechnym zjawiskiem, gdy test jest używany w cytometrii przepływowej i nadal nie mają uzasadnienia
- Pokazano tutaj, że zastosowanie jodku propidyny w połączeniu z zielonym fluorescencyjnym barwnikiem całkowitego kwasu nukleinowego na napromieniowane UVA komórki Escherichia coli, Salmonella enterica serovar Typhimurium, Shigella flexneri oraz środowisko bakterii słodkowodnych dały wyraźny i charakterystyczny wzór barwienia cytometrii przepływowej .
- W przypadku Gram-ujemnej bakterii E. coli, jak również w przypadku dwóch patogenów jelitowych, wzorzec ten może być związany z obecnością pośrednich stanów komórkowych charakteryzujących się stopniem uszkodzenia wywoływanego specyficznie na zewnętrznej błonie bakterii .
- Hipotezę tę potwierdza fakt, że nienapromieniowane komórki poddane działaniu EDTA wykazują te same właściwości barwienia . Wręcz przeciwnie, tego wzoru nie zaobserwowano w gram-dodatnich Enterococcus faecalis, które nie mają zewnętrznej błony . Nasze obserwacje dodają nowy aspekt do barwienia LIVE/DEAD, które do tej pory uważano za zależne tylko od przepuszczalności błony cytoplazmatycznej.
LIVE/DEAD BacLight : zastosowanie nowej metody szybkiego barwienia do bezpośredniego oznaczania liczby żywych i wszystkich bakterii w wodzie pitnej.
- Zastosowano szybką metodę barwienia epifluorescencyjnego przy użyciu zestawu LIVE/DEAD Bacterial Viability Kit (BacLight), aby oszacować zarówno żywotne, jak i całkowitą liczbę bakterii w wodzie pitnej. BacLight składa się z dwóch barwników wiążących kwasy nukleinowe: SYTO 9 i jodku propidyny. SYTO 9 penetruje wszystkie błony bakteryjne i barwi komórki na zielono, podczas gdy jodek propidyny penetruje tylko komórki z uszkodzonymi błonami , a połączenie tych dwóch barwników daje czerwone fluoryzujące komórki.
- Stwierdzono, że optymalne warunki inkubacji to 15 do 20 min, w temperaturze pokojowej w ciemności. Całkowite (czerwone + zielone) i żywotne (zielone) komórki mogą być zatem liczone jednocześnie. Zbadano czynniki wpływające na procedurę barwienia (dodatek aldehydu glutarowego, czas barwienia , wpływ chloru). W przypadku braku stresu, liczby żywych bakterii BacLight były porównywalne z liczbą 5-cyjano-2,3-ditolilotetrazoliową (CTC).
- Całkowite zliczenia BacLight były porównywalne ze zliczeniami pomarańczy akrydyny (różniące się o <0,1 log/ml). Jednak wzrost stresów środowiskowych (chlor, tempo wzrostu lub temperatura) wywołał spadek żywotności, który był bardziej wyraźny w przypadku liczby żywych CTC i płytek niż w przypadku liczby żywych komórek BacLight.
C – kit immunopozytywne komórki śródmiąższowe (typu Cajal) w ludzkim myometrium.
- Poprzednie doniesienia opisujące podobne do Cajala komórki śródmiąższowe w ludzkiej macicy są sprzeczne pod względem immunoreaktywności c- kit : albo ujemna (ale wimentyno-dodatnia) w ciężarnej myometrium, albo dodatnia, przypuszczalnie w endometrium.
- Celem tego badania była weryfikacja istnienia ludzkich komórek śródmiąższowych podobnych do Cajala w myometrium (m-CLIC). Zastosowano sześć różnych, uzupełniających się podejść: 1) barwienie próbek tkanek przy życiu błękitem metylenowym (kriosekcje ), 2) barwienie przyżyciowe błękitem metylenowym i zielenią Janus B (odpowiednio markery m-CLIC i mitochondrialne) oraz 3) pojedyncza jednostka zewnątrzkomórkowa zapisy elektrofizjologiczne w hodowlach komórkowych, 4) niekonwencjonalna mikroskopia świetlna na utrwalonym aldehydzie glutarowym/osm,
- Zatopione w Epon półcienkie skrawki (mniej niż 1 mikrom) barwione błękitem toluidynowym (TSM), 5) transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM) i 6) immunofluorescencja (IF). Znaleźliśmy m-CLIC w krioskracjach myometrium oraz w hodowlach komórkowych. In vitro m-CLIC stanowił około 7% całkowitej liczby komórek. m-CLIC miał 2-3 charakterystyczne wyrostki, które były bardzo długie (około 60 mikrometrów), bardzo cienkie (< lub =0,5 mikrometra) i jednokształtne.
- Rozszerzone fragmenty procesów zwykle mieściły mitochondria. In vitro, m-CLIC wykazywał spontaniczną aktywność elektryczną (62,4 +/- 7,22 mV potencjałów błonowych , krótki czas trwania: 1,197 +/- 0,04 ms). Ponadto m-CLIC spełniał zwykłe kryteria TEM, tzw. standardy „złote” lub „platynowe” (np. obecność nieciągłej blaszki podstawnej, kaweoli, retikulum endoplazmatycznego oraz bliski kontakt między sobą, z miocytami, włóknami nerwowymi i /lub kapilary itp.).
Taq DNA Polymerase (500U)
9K-001-0001 Bio Basic 500U 209.29 EUR Fast-Taq DNA Polymerase (500U)
9K-001-0036 Bio Basic 500U 420.65 EUR Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (500U)
9K-001-0031 Bio Basic 500U 351.28 EUR Pfu DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (500U)
9K-001-0009 Bio Basic 500U 686.4 EUR Fast-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (500U)
9K-001-0003 Bio Basic 500U 575.22 EUR T7 RNA Polymerase (5000U)
9K-005-0004 Bio Basic 5000U 316.82 EUR Taq DNA Polymerase (3000U)
9K-001-0002 Bio Basic 3000U 582 EUR Taq DNA Polymerase (6000U)
9K-001-0033 Bio Basic 6000U 1234.5 EUR Taq DNA Polymerase (1000U)
9K-001-0035 Bio Basic 1000U 418.62 EUR SP6 RNA Polymerase (5000U)
9K-005-0003 Bio Basic 5000U 462.47 EUR ACTaq? Taq DNA Polymerase, 1000U
E2100-1000U ACTGene each 260.4 EUR ACTaq? Long DNA Polymerase, 1000U
E2200-1000U ACTGene each 282 EUR ACTaq? Taq Blue DNA Polymerase, 1000U
E2100B-1000U ACTGene each 272.4 EUR ACTaq? Taq DNA Polymerase, 250U
E2100-250U ACTGene each 122.4 EUR ACTaq? Blue Long DNA Polymerase, 1000U
E2200B-1000U ACTGene each 290.4 EUR ACTaq? Long DNA Polymerase, 250U
E2200-250U ACTGene each 127.2 EUR ACTaq? Hot-Start DNA Polymerase, 1000U
E3500-1000U ACTGene each 535.2 EUR ACTaq? Taq Blue DNA Polymerase, 250U
E2100B-250U ACTGene each 126 EUR ACTaq? Blue Long DNA Polymerase, 250U
E2200B-250U ACTGene each 132 EUR ACTaq? Hot-Start DNA Polymerase, 250U
E3500-250U ACTGene each 204 EUR DNA Polymerase I, 10u/ul
BEP0041 Bio Basic 500U 128.9 EUR ACTaq? High Fidelity DNA Polymerase,250U
E2000-250U ACTGene each 145.2 EUR Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (6000U)
9K-001-0018 Bio Basic 6000U 1536.74 EUR Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (3000U)
9K-001-0032 Bio Basic 3000U 1088.87 EUR Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (1000U)
9K-001-0034 Bio Basic 1000U 518.84 EUR PHI29 DNA Polymerase, 10u/ul
BEP0091 Bio Basic 250U 187.37 EUR PHI29 DNA Polymerase, 10u/ul
BEP0092 Bio Basic 1KU 561.12 EUR Recombinant other Pfu DNA Polymerase Protein, Untagged, E.coli-500U
QP13023-500U EnQuireBio 500U 360 EUR LR DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (250U)
9K-001-0008 Bio Basic 250U 404.52 EUR Genorise® 5 x Polymerase Mix
GR-108010 Genorise Scientific 8 x 1.5 mL 498 EUR Pfu DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (250U)
9K-001-0010 Bio Basic 250U 396.7 EUR BIO-X-ACT Short DNA Polymerase
BIO-21065 Bioline 500 Units Ask for price Pfu DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (10, 000U)
9K-001-0021 Bio Basic 10000U 5384.4 EUR Fast-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (2500U)
9K-001-0004 Bio Basic 2500U 2465.38 EUR High-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (5000U)
9K-001-0020 Bio Basic 5000U 2878.8 EUR High-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (250U)
9K-001-0005 Bio Basic 250U 384.17 EUR Accuris High Fidelity DNA Polymerase, sample, 20 units
PR1000-HF-S Benchmark Scientific 1 PC 7.1 EUR DNA Polymerase
ABD3082 Lifescience Market 100 ug 525.6 EUR DNA Polymerase
ABF5235 Lifescience Market 100 ug 525.6 EUR HBV polymerase (455 - 463)
5-01273 CHI Scientific 4 x 5mg Ask for price T4 DNA Polymerase
N101-01 Vazyme 2000 U 278.4 EUR T4 DNA Polymerase
M1211-100 Biovision each 385.2 EUR DNA polymerase ? (Rat)
10-101 Sceti 20ug 465.6 EUR DNA polymerase ? (Rat)
10-102 Sceti 100ug 1107.6 EUR Taq DNA Polymerase
BA00103 Cusabio 500U 104.4 EUR Taq DNA Polymerase
BA00104 Bioatlas 1000U 147.6 EUR Taq DNA Polymerase
BA00105 Bioatlas 2500U 278.4 EUR Pfu DNA Polymerase
BA00503 Bioatlas 500U 174 EUR Pfu DNA Polymerase
BA00504 Bioatlas 1000U 286.8 EUR Pfu DNA Polymerase
BA00505 Bioatlas 2500U 626.4 EUR Taq DNA polymerase
BT10101 Bioatlas 500U 96 EUR Taq DNA polymerase
BT10102 Bioatlas 1000U 130.8 EUR Taq DNA polymerase
BT10103 Bioatlas 2000U 200.4 EUR Taq DNA Polymerase
9001-2500 Biovision each 614.4 EUR Taq DNA Polymerase
9001-500 Biovision each 229.2 EUR PFU DNA Polymerase
9003-2500 Biovision each 614.4 EUR PFU DNA Polymerase
9003-500 Biovision each 216 EUR Laq? DNA Polymerase
9004-2500 Biovision each 732 EUR Laq? DNA Polymerase
9004-500 Biovision each 261.6 EUR Taq DNA Polymerase
L7051001 Biochain 1000 unit 159 EUR Taq DNA Polymerase
L7051200 Biochain 200 unit 41 EUR Pfu DNA Polymerase
S116 GeneOn 1x250 units 91.2 EUR Pfu DNA Polymerase
S117 GeneOn 2x250 units 112.8 EUR Pfu DNA Polymerase
S118 GeneOn 10x250 units 363.6 EUR Bst DNA Polymerase
S600 GeneOn 2000 U 128.4 EUR SARS-Cov-2 RNA polymerase assay kit plus -20 (20 assays, enzyme included)
S2RPA020KE ProFoldin 20 assays 396 EUR MyFi DNA Polymerase
BIO-21117 Bioline 250 Units Ask for price MyFi DNA Polymerase
BIO-21117/S Bioline Sample Ask for price MyFi DNA Polymerase
BIO-21118 Bioline 500 Units Ask for price MyFi DNA Polymerase
BIO-21119 Bioline 2500 Units Ask for price MyTaq DNA Polymerase
BIO-21105 Bioline 500 units Ask for price MyTaq DNA Polymerase
BIO-21105/S Bioline Sample Ask for price MyTaq DNA Polymerase
BIO-21106 Bioline 2500 units Ask for price MyTaq DNA Polymerase
BIO-21107 Bioline 5000 units Ask for price Ready? DNA Polymerase
M1146-1000 Biovision each 398.4 EUR Ready? DNA Polymerase
M1146-10000 Biovision each 1279.2 EUR Ready? DNA Polymerase
M1146-5000 Biovision each 960 EUR Phi29 DNA Polymerase
M1239-1000 Biovision each 373.2 EUR Kodaq DNA Polymerase
G498 ABM 250 U (50 ul) 104.4 EUR Kodaq DNA Polymerase
G499 ABM 1000 U (200 ul) 189.6 EUR HotTaq DNA Polymerase
BA00203 Bioatlas 500U 174 EUR HotTaq DNA Polymerase
BA00204 Bioatlas 1000U 286.8 EUR HotTaq DNA Polymerase
BA00205 Bioatlas 2500U 626.4 EUR RedTaq DNA Polymerase
BA00303 Bioatlas 500U 147.6 EUR RedTaq DNA Polymerase
BA00304 Bioatlas 1000U 235.2 EUR RedTaq DNA Polymerase
BA00305 Bioatlas 2500U 495.6 EUR BIOTAQ DNA Polymerase
BIO-21040 Bioline 500 Units Ask for price BIOTAQ DNA Polymerase
BIO-21060 Bioline 2500 Units Ask for price Ranger DNA Polymerase
BIO-21121 Bioline 250 Units Ask for price Ranger DNA Polymerase
BIO-21121/S Bioline Sample Ask for price Ranger DNA Polymerase
BIO-21122 Bioline 500 Units Ask for price HotTaq DNA polymerase
BT10201 Bioatlas 500U 144 EUR HotTaq DNA polymerase
BT10202 Bioatlas 1000U 228 EUR AceTaq DNA Polymerase
P401-d1 Vazyme 250 U 163.2 EUR AceTaq DNA Polymerase
P401-d2 Vazyme 1000 U 272.4 EUR AceTaq DNA Polymerase
P401-d3 Vazyme 3000 U 536.4 EUR Breeze? DNA Polymerase
M1148-1000 Biovision each 1246.8 EUR Breeze? DNA Polymerase
M1148-250 Biovision each 464.4 EUR AceTaq DNA Polymerase
P401-MD1 Vazyme 250 U 46.4 EUR HBV polymerase (455 463) Peptide
20-abx266100 Abbexa - 493.20 EUR
- 794.40 EUR
- 376.80 EUR
- 10 mg
- 25 mg
- 5 mg
IF wykazał, że m-CLIC wyraża CD117/c- kit , czasami związany z CD34, z wimentyną w swoich procesach. Podsumowując, opisujemy komórki śródmiąższowe podobne do Cajala w myometrium, które wykazują powinowactwo do barwników przyżyciowych: błękit metylenowy i zieleń Janus B, spełniają (wszystkie) kryteria TEM, wykazują ekspresję CD117/c – kit i wykazują spontaniczną aktywność elektryczną.