Ginsenozyd Rg3 promuje apoptozę komórek HeLa poprzez regulację autofagii

    • 20( S )-ginsenozyd Rg3 (GRg3) ma różne bioaktywności, w tym działanie przeciwnowotworowe i hamowanie autofagii. Jednak żadne doniesienia nie badały pojawienia się autofagii lub związku między autofagią a apoptozą w komórkach HeLa traktowanych 20( S )-GRg3. Żywotność komórek mierzono za pomocą testów CCK-8 (  zestaw do liczenia komórek -8).
    • Apoptozę i cykl komórkowy analizowano za pomocą  barwienia Hoechst 33342  i cytometrii przepływowej. Ścieżki apoptotyczne zbadano za pomocą oznaczania ROS (reaktywnych form tlenu) i testów rodaminy 123.
    • Do określenia zmian w poziomach białka zastosowano analizę Western blot. Indukcję autofagii monitorowano przez kwasowe  barwienie organelli pęcherzykowych  i transfekcję EGFP-LC3. 20 S )-GRg3 hamowało autofagię komórek w stanie głodu, uniemożliwiając komórkom utrzymanie  stanu stacjonarnego  poprzez autofagię, a następnie indukowanie apoptozy. 20( S )-GRg3 zablokowało późny etap autofagii (fuzja lizosomów i degradacja lizosomów autofagicznych), w tym zmniejszenie kwaśnej fluorescencji organelli pęcherzykowych, zwiększenie konwersji LC3 I-II, akumulację fluorescencji EGFP-LC3, GFP-mRFP-
    • Stosunek czerwono-zielonej fluorescencji LC3, degradacja substratu p62 i utrata równowagi między autofagią a apoptozą, która indukowała apoptozę.  Wzrost ROS, spadek potencjału błony mitochondrialnej  , induktor apoptozy
    • AIF został uwolniony z mitochondriów i nastąpił transfer jądra, wywołując serię kolejnych zdarzeń apoptotycznych. Induktor autofagii rapamycyna hamował apoptozę indukowaną przez 20( S )-GRg3, podczas gdy inhibitor autofagii BA1 promował apoptozę indukowaną przez 20( S )-GRg3.
    • Zatem 20( S )-GRg3 promowało apoptozę komórek HeLa poprzez regulację autofagii. W stanie autofagicznym 20( S )-GRg3 może być stosowany jako nowy inhibitor autofagii w synergii z terapiami blokującymi nowotwór, takimi jak chemioterapia, co wspiera jego zastosowanie w medycynie.

    Lenalidomid stabilizuje receptor erytropoetyny poprzez hamowanie ligazy ubikwityny E3 RNF41.

    • W podgrupie pacjentów z zespołem mielodysplastycznym (MDS) innym niż del(5q) lenalidomid promuje kompetencje linii erytroidalnej i skuteczną erytropoezę.
    • Aby określić mechanizm, za pomocą którego lenalidomid promuje erytropoezę, zbadaliśmy jego działanie na dynamikę komórkową receptora erytropoetyny (EpoR) . Lenalidomid regulował w górę ekspresję i stabilność EpoR związanego z JAK2 w komórkach erytroidalnych UT7 i pierwotnych komórkach progenitorowych CD71+. Wpływ lenalidomidu na obrót receptora był specyficzny dla receptora cytokin typu I, o czym świadczy współregulacja receptora IL3-Rα, ale nie c- Kit .
    • Aby wyjaśnić ten mechanizm, zbadaliśmy wpływ lenalidomidu na ligazę ubikwityny E3 RNF41. Lenalidomid promował asocjację EpoR/RNF41 i hamował autoubikwitynację RNF41, której towarzyszyło zmniejszenie ubikwitynacji EpoR.
    • Aby potwierdzić, że RNF41 jest głównym celem odpowiedzialnym za stabilizację EpoR, komórki HEK293T transfekowano wektorami ekspresyjnymi genu EpoR i/lub RNF41. Ekspresja EpoR w stanie stacjonarnym została zmniejszona w komórkach EpoR/RNF41, podczas gdy regulacja w górę EpoR przez lenalidomid została zniesiona, co wskazuje, że komórkowy RNF41 jest krytycznym wyznacznikiem modulacji receptora indukowanego lekiem.
    • Warto zauważyć, że supresja ekspresji genu CRBN przez shRNA nie zmieniła regulacji w górę EpoR, co wskazuje, że indukowana lekami modulacja receptora jest niezależna od cereblonu. Barwienie immunohistochemiczne   wykazało, że ekspresja RNF41 zmniejszyła się w pierwotnych komórkach erytroidalnych pacjentów odpowiadających na lenalidomid, co sugeruje, że ekspresja komórkowego RNF41 zasługuje na zbadanie jako biomarkera odpowiedzi na lenalidomid.
    • Nasze odkrycia wskazują, że lenalidomid ma działanie hamujące ligazę ubikwitynową E3, które rozciąga się na RNF41 i że hamowanie autoubikwitynacji RNF41 sprzyja  akumulacji w błonie kompetentnych kompleksów JAK2/EpoR sygnalizujących, które zwiększają odpowiedź Epo.

    Ocena i interpretacja żywotności bakterii przy użyciu zestawu LIVE/DEAD BacLight  Kit  w połączeniu z cytometrią przepływową.

    1. Dostępny na rynku zestaw LIVE/DEAD BacLight  cieszy się coraz większą popularnością wśród badaczy z różnych dziedzin mikrobiologii. Jego zastosowanie w połączeniu z cytometrią przepływową wywołało nowe pytania dotyczące interpretacji  wyników barwienia LIVE/DEAD. Stany pośrednie, zwykle trudne do wykrycia za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej, są powszechnym zjawiskiem, gdy test jest używany w cytometrii przepływowej i nadal nie mają uzasadnienia
    2. Pokazano tutaj, że zastosowanie jodku propidyny w połączeniu z zielonym fluorescencyjnym barwnikiem całkowitego kwasu nukleinowego na napromieniowane UVA komórki Escherichia coli, Salmonella enterica serovar Typhimurium, Shigella flexneri oraz środowisko bakterii słodkowodnych dały wyraźny i charakterystyczny  wzór barwienia cytometrii przepływowej  .
    3. W przypadku Gram-ujemnej bakterii E. coli, jak również w przypadku dwóch patogenów jelitowych, wzorzec ten może być związany z obecnością pośrednich stanów komórkowych charakteryzujących się stopniem uszkodzenia wywoływanego specyficznie na zewnętrznej  błonie bakterii .
    4. Hipotezę tę potwierdza fakt, że nienapromieniowane komórki poddane działaniu EDTA wykazują te same   właściwości barwienia . Wręcz przeciwnie, tego wzoru nie zaobserwowano w gram-dodatnich Enterococcus faecalis, które nie mają zewnętrznej  błony . Nasze obserwacje dodają nowy aspekt do barwienia LIVE/DEAD, które do tej pory uważano za zależne tylko od   przepuszczalności błony cytoplazmatycznej.

    LIVE/DEAD BacLight : zastosowanie nowej metody szybkiego  barwienia  do bezpośredniego oznaczania liczby żywych i wszystkich bakterii w wodzie pitnej.

    • Zastosowano szybką  metodę barwienia epifluorescencyjnego  przy użyciu zestawu LIVE/DEAD Bacterial Viability  Kit  (BacLight), aby oszacować zarówno żywotne, jak i całkowitą liczbę bakterii w wodzie pitnej. BacLight składa się z dwóch barwników wiążących kwasy nukleinowe: SYTO 9 i jodku propidyny. SYTO 9 penetruje wszystkie  błony bakteryjne  i barwi komórki na zielono, podczas gdy jodek propidyny penetruje tylko komórki z uszkodzonymi  błonami , a połączenie tych dwóch barwników daje czerwone fluoryzujące komórki.
    • Stwierdzono, że optymalne warunki inkubacji to 15 do 20 min, w temperaturze pokojowej w ciemności. Całkowite (czerwone + zielone) i żywotne (zielone) komórki mogą być zatem liczone jednocześnie. Zbadano czynniki wpływające na  procedurę barwienia  (dodatek aldehydu glutarowego,  czas barwienia  , wpływ chloru). W przypadku braku stresu, liczby żywych bakterii BacLight były porównywalne z liczbą 5-cyjano-2,3-ditolilotetrazoliową (CTC).
    • Całkowite zliczenia BacLight były porównywalne ze zliczeniami pomarańczy akrydyny (różniące się o <0,1 log/ml). Jednak wzrost stresów środowiskowych (chlor, tempo wzrostu lub temperatura) wywołał spadek żywotności, który był bardziej wyraźny w przypadku liczby żywych CTC i płytek niż w przypadku liczby żywych komórek BacLight.

    C – kit  immunopozytywne komórki śródmiąższowe (typu Cajal) w ludzkim myometrium.

    • Poprzednie doniesienia opisujące podobne do Cajala komórki śródmiąższowe w ludzkiej macicy są sprzeczne pod względem immunoreaktywności c- kit  : albo ujemna (ale wimentyno-dodatnia) w ciężarnej myometrium, albo dodatnia, przypuszczalnie w endometrium.
    • Celem tego badania była weryfikacja istnienia ludzkich komórek śródmiąższowych podobnych do Cajala w myometrium (m-CLIC). Zastosowano sześć różnych, uzupełniających się podejść: 1) barwienie  próbek tkanek przy  życiu błękitem metylenowym (kriosekcje  ), 2) barwienie przyżyciowe błękitem metylenowym i zielenią Janus B  (odpowiednio markery m-CLIC i mitochondrialne) oraz 3) pojedyncza jednostka zewnątrzkomórkowa zapisy elektrofizjologiczne w hodowlach komórkowych, 4) niekonwencjonalna mikroskopia świetlna na utrwalonym aldehydzie glutarowym/osm,
    • Zatopione w Epon półcienkie skrawki (mniej niż 1 mikrom) barwione błękitem toluidynowym (TSM), 5) transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM) i 6) immunofluorescencja (IF). Znaleźliśmy m-CLIC w krioskracjach myometrium oraz w hodowlach komórkowych. In vitro m-CLIC stanowił około 7% całkowitej liczby komórek. m-CLIC miał 2-3 charakterystyczne wyrostki, które były bardzo długie (około 60 mikrometrów), bardzo cienkie (< lub =0,5 mikrometra) i jednokształtne.
    • Rozszerzone fragmenty procesów zwykle mieściły mitochondria. In vitro, m-CLIC wykazywał spontaniczną aktywność elektryczną (62,4 +/- 7,22 mV  potencjałów błonowych  , krótki czas trwania: 1,197 +/- 0,04 ms). Ponadto m-CLIC spełniał zwykłe kryteria TEM, tzw. standardy „złote” lub „platynowe” (np. obecność nieciągłej blaszki podstawnej, kaweoli, retikulum endoplazmatycznego oraz bliski kontakt między sobą, z miocytami, włóknami nerwowymi i /lub kapilary itp.).

     

    Taq DNA Polymerase (500U)

    9K-001-0001 Bio Basic 500U 209.29 EUR

    Fast-Taq DNA Polymerase (500U)

    9K-001-0036 Bio Basic 500U 420.65 EUR

    Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (500U)

    9K-001-0031 Bio Basic 500U 351.28 EUR

    Pfu DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (500U)

    9K-001-0009 Bio Basic 500U 686.4 EUR

    Fast-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (500U)

    9K-001-0003 Bio Basic 500U 575.22 EUR

    T7 RNA Polymerase (5000U)

    9K-005-0004 Bio Basic 5000U 316.82 EUR

    Taq DNA Polymerase (3000U)

    9K-001-0002 Bio Basic 3000U 582 EUR

    Taq DNA Polymerase (6000U)

    9K-001-0033 Bio Basic 6000U 1234.5 EUR

    Taq DNA Polymerase (1000U)

    9K-001-0035 Bio Basic 1000U 418.62 EUR

    SP6 RNA Polymerase (5000U)

    9K-005-0003 Bio Basic 5000U 462.47 EUR

    ACTaq? Taq DNA Polymerase, 1000U

    E2100-1000U ACTGene each 260.4 EUR

    ACTaq? Long DNA Polymerase, 1000U

    E2200-1000U ACTGene each 282 EUR

    ACTaq? Taq Blue DNA Polymerase, 1000U

    E2100B-1000U ACTGene each 272.4 EUR

    ACTaq? Blue Long DNA Polymerase, 1000U

    E2200B-1000U ACTGene each 290.4 EUR

    ACTaq? Taq DNA Polymerase, 250U

    E2100-250U ACTGene each 122.4 EUR

    ACTaq? Long DNA Polymerase, 250U

    E2200-250U ACTGene each 127.2 EUR

    ACTaq? Hot-Start DNA Polymerase, 1000U

    E3500-1000U ACTGene each 535.2 EUR

    ACTaq? Taq Blue DNA Polymerase, 250U

    E2100B-250U ACTGene each 126 EUR

    ACTaq? Blue Long DNA Polymerase, 250U

    E2200B-250U ACTGene each 132 EUR

    ACTaq? Hot-Start DNA Polymerase, 250U

    E3500-250U ACTGene each 204 EUR

    Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (6000U)

    9K-001-0018 Bio Basic 6000U 1536.74 EUR

    Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (3000U)

    9K-001-0032 Bio Basic 3000U 1088.87 EUR

    Taq DNA Polymerase with dNTP Mix (1000U)

    9K-001-0034 Bio Basic 1000U 518.84 EUR

    DNA Polymerase I, 10u/ul

    BEP0041 Bio Basic 500U 128.9 EUR

    ACTaq? High Fidelity DNA Polymerase,250U

    E2000-250U ACTGene each 145.2 EUR

    PHI29 DNA Polymerase, 10u/ul

    BEP0091 Bio Basic 250U 187.37 EUR

    PHI29 DNA Polymerase, 10u/ul

    BEP0092 Bio Basic 1KU 561.12 EUR

    LR DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (250U)

    9K-001-0008 Bio Basic 250U 404.52 EUR

    Pfu DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (250U)

    9K-001-0010 Bio Basic 250U 396.7 EUR

    Pfu DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (10, 000U)

    9K-001-0021 Bio Basic 10000U 5384.4 EUR

    Fast-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (2500U)

    9K-001-0004 Bio Basic 2500U 2465.38 EUR

    High-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (5000U)

    9K-001-0020 Bio Basic 5000U 2878.8 EUR

    High-Taq DNA Polymerase with 10mM dNTP Mix (250U)

    9K-001-0005 Bio Basic 250U 384.17 EUR

    Genorise® 5 x Polymerase Mix

    GR-108010 Genorise Scientific 8 x 1.5 mL 498 EUR

    BIO-X-ACT Short DNA Polymerase

    BIO-21065 Bioline 500 Units Ask for price

    Recombinant other Pfu DNA Polymerase Protein, Untagged, E.coli-500U

    QP13023-500U EnQuireBio 500U 360 EUR

    HBV polymerase (455 - 463)

    5-01273 CHI Scientific 4 x 5mg Ask for price

    DNA Polymerase

    ABF5235 Lifescience Market 100 ug 525.6 EUR

    DNA Polymerase

    ABD3082 Lifescience Market 100 ug 525.6 EUR

    Human herpesvirus 6A DNA polymerase processivity factor (U27)

    1-CSB-YP346759HJZ Cusabio
    • 703.20 EUR
    • 358.80 EUR
    • 2606.40 EUR
    • 1080.00 EUR
    • 1730.40 EUR
    • 458.40 EUR
    • 100ug
    • 10ug
    • 1MG
    • 200ug
    • 500ug
    • 50ug

    T4 DNA Polymerase

    M1211-100 Biovision each 385.2 EUR

    T4 DNA Polymerase

    N101-01 Vazyme 2000 U 278.4 EUR

    DNA polymerase ? (Rat)

    10-101 Sceti 20ug 465.6 EUR

    DNA polymerase ? (Rat)

    10-102 Sceti 100ug 1107.6 EUR

    Taq DNA Polymerase

    9001-2500 Biovision each 614.4 EUR

    Taq DNA Polymerase

    9001-500 Biovision each 229.2 EUR

    PFU DNA Polymerase

    9003-2500 Biovision each 614.4 EUR

    PFU DNA Polymerase

    9003-500 Biovision each 216 EUR

    Laq? DNA Polymerase

    9004-2500 Biovision each 732 EUR

    Laq? DNA Polymerase

    9004-500 Biovision each 261.6 EUR

    Taq DNA polymerase

    BT10101 Bioatlas 500U 96 EUR

    Taq DNA polymerase

    BT10102 Bioatlas 1000U 130.8 EUR

    Taq DNA polymerase

    BT10103 Bioatlas 2000U 200.4 EUR

    Taq DNA Polymerase

    BA00103 Cusabio 500U 104.4 EUR

    Taq DNA Polymerase

    BA00104 Bioatlas 1000U 147.6 EUR

    Taq DNA Polymerase

    BA00105 Bioatlas 2500U 278.4 EUR

    Pfu DNA Polymerase

    BA00503 Bioatlas 500U 174 EUR

    Pfu DNA Polymerase

    BA00504 Bioatlas 1000U 286.8 EUR

    Pfu DNA Polymerase

    BA00505 Bioatlas 2500U 626.4 EUR

    Taq DNA Polymerase

    L7051001 Biochain 1000 unit 159 EUR

    Taq DNA Polymerase

    L7051200 Biochain 200 unit 41 EUR

    Pfu DNA Polymerase

    S116 GeneOn 1x250 units 91.2 EUR

    Pfu DNA Polymerase

    S117 GeneOn 2x250 units 112.8 EUR

    Pfu DNA Polymerase

    S118 GeneOn 10x250 units 363.6 EUR

    Bst DNA Polymerase

    S600 GeneOn 2000 U 128.4 EUR

    Accuris High Fidelity DNA Polymerase, sample, 20 units

    PR1000-HF-S Benchmark Scientific 1 PC 7.1 EUR

    HBV polymerase (455 463) Peptide

    20-abx266100 Abbexa
    • 493.20 EUR
    • 794.40 EUR
    • 376.80 EUR
    • 10 mg
    • 25 mg
    • 5 mg

    T4 DNA Polymerase (5,000 U/ml)

    RK20539 Abclonal 25 U Ask for price

    MyFi DNA Polymerase

    BIO-21117 Bioline 250 Units Ask for price

    MyFi DNA Polymerase

    BIO-21117/S Bioline Sample Ask for price

    MyFi DNA Polymerase

    BIO-21118 Bioline 500 Units Ask for price

    MyFi DNA Polymerase

    BIO-21119 Bioline 2500 Units Ask for price

    T4 DNA Polymerase - 500 units

    3222 Intact Genomics 1/EA 247.2 EUR

    E. coli RNA polymerase Assay Kit Plus (E. coli RNA polymerase included)

    RPA100KE ProFoldin 100 assays 467.15 EUR

    MyTaq DNA Polymerase

    BIO-21105 Bioline 500 units Ask for price

    MyTaq DNA Polymerase

    BIO-21105/S Bioline Sample Ask for price

    MyTaq DNA Polymerase

    BIO-21106 Bioline 2500 units Ask for price

    MyTaq DNA Polymerase

    BIO-21107 Bioline 5000 units Ask for price

    Ready? DNA Polymerase

    M1146-1000 Biovision each 398.4 EUR

    Ready? DNA Polymerase

    M1146-10000 Biovision each 1279.2 EUR

    Ready? DNA Polymerase

    M1146-5000 Biovision each 960 EUR

    Phi29 DNA Polymerase

    M1239-1000 Biovision each 373.2 EUR

    Kodaq DNA Polymerase

    G498 ABM 250 U (50 ul) 104.4 EUR

    Kodaq DNA Polymerase

    G499 ABM 1000 U (200 ul) 189.6 EUR

    Taq DNA Polymerase - 5,000 units

    3245 Intact Genomics 1/EA 620.4 EUR

    HBVpol502, HBV polymerase (502 - 510)

    5-01274 CHI Scientific 4 x 5mg Ask for price

    HBVpol655, HBV polymerase (655 - 663)

    5-01275 CHI Scientific 4 x 5mg Ask for price

    HotTaq DNA polymerase

    BT10201 Bioatlas 500U 144 EUR

    HotTaq DNA polymerase

    BT10202 Bioatlas 1000U 228 EUR

    HotTaq DNA Polymerase

    BA00203 Bioatlas 500U 174 EUR

    HotTaq DNA Polymerase

    BA00204 Bioatlas 1000U 286.8 EUR

    HotTaq DNA Polymerase

    BA00205 Bioatlas 2500U 626.4 EUR

    RedTaq DNA Polymerase

    BA00303 Bioatlas 500U 147.6 EUR

    RedTaq DNA Polymerase

    BA00304 Bioatlas 1000U 235.2 EUR

    RedTaq DNA Polymerase

    BA00305 Bioatlas 2500U 495.6 EUR

    BIOTAQ DNA Polymerase

    BIO-21040 Bioline 500 Units Ask for price

    BIOTAQ DNA Polymerase

    BIO-21060 Bioline 2500 Units Ask for price

    Ranger DNA Polymerase

    BIO-21121 Bioline 250 Units Ask for price

    Ranger DNA Polymerase

    BIO-21121/S Bioline Sample Ask for price

    Ranger DNA Polymerase

    BIO-21122 Bioline 500 Units Ask for price

    IF wykazał, że m-CLIC wyraża CD117/c- kit , czasami związany z CD34, z wimentyną w swoich procesach. Podsumowując, opisujemy komórki śródmiąższowe podobne do Cajala w myometrium, które wykazują powinowactwo do barwników przyżyciowych: błękit metylenowy i zieleń Janus B, spełniają (wszystkie) kryteria TEM, wykazują ekspresję CD117/c – kit  i wykazują spontaniczną aktywność elektryczną.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.