11 czerwca, 2022
Antibodies, Assay Kits, Biology Cells
Brak komentarzy

Aktywacja in vivo szlaku p53 przez małocząsteczkowych antagonistów MDM2

MDM2 wiąże białko  supresorowe  nowotworu p53   z wysokim powinowactwem i ujemnie moduluje jego aktywność transkrypcyjną i stabilność. Nadekspresja MDM2, występująca w wielu  ludzkich nowotworach , skutecznie upośledza  funkcję p53  . Hamowanie interakcji MDM2- p53  może stabilizować  p53  i może oferować nową strategię  leczenia raka  .
W tym miejscu identyfikujemy silnych i selektywnych małocząsteczkowych antagonistów MDM2 i potwierdzamy ich sposób działania poprzez struktury krystaliczne kompleksów. Związki te wiążą MDM2 w  kieszonce  wiążącej p53 i aktywują  szlak  p53 w komórkach rakowych  , prowadząc do zatrzymania cyklu komórkowego, apoptozy i zahamowania wzrostu  heteroprzeszczepów ludzkich  guzów  u myszy nagich.

Onkoproteina E6 kodowana przez wirusa brodawczaka ludzkiego  typu 16 i 18 sprzyja degradacji  p53 .

  1. Białko E6   kodowane przez onkogennego  wirusa brodawczaka ludzkiego  typu 16 i 18 jest jednym z dwóch produktów wirusowych ulegających ekspresji w  nowotworach związanych z HPV . E6 to białko onko ,  które współpracuje z E7 w celu unieśmiertelnienia pierwotnych  ludzkich  keratynocytów. Wgląd w mechanizm działania E6 w onkogenezie zapewnia obserwacja, że  ​​białko E6 kodowane przez HPV-16 i HPV-18 może tworzyć kompleksy z białkiem p53   typu  dzikiego  in vitro.
  2.  Gen  p53 typu  dzikiego ma właściwości supresorowe nowotworu  i jest celem dla kilku białek onko kodowanych przez wirusy nowotworów  DNA   . W tym badaniu pokazujemy, że  białka E6  z onkogennych HPV, które wiążą  p53 ,  stymulują degradację  p53 . Promowana przez E6 degradacja  p53  jest zależna od ATP i obejmuje system proteaz zależny od ubikwityny. Selektywna degradacja  białek komórkowych,  takich jak  p53  o negatywnych funkcjach regulacyjnych, dostarcza nowego mechanizmu działania dominujących białek onko .

Aktywatory drobnocząsteczkowe sirtuin wydłużają żywotność Saccharomyces cerevisiae.

  1. W różnych organizmach ograniczenie kalorii spowalnia tempo starzenia i zwiększa maksymalną długość życia. W pączkujących drożdżach Saccharomyces cerevisiae ograniczenie kalorii wydłuża życie poprzez zwiększenie aktywności Sir2 (ref. 1), członka konserwatywnej rodziny sirtuin zależnych od NAD(+)  białkowych  deacetylaz. Do tej rodziny należy SIR-2.1, enzym Caenorhabditis elegans, który reguluje długość życia, oraz SIRT1,  ludzka  deacetylaza, która promuje przeżycie komórek poprzez ujemną regulację  supresora nowotworu p53   . Tutaj informujemy o odkryciu trzech klas małych cząsteczek, które aktywują sirtuiny.
  2. Pokazujemy, że silny aktywator resweratrol, polifenol występujący w czerwonym winie, obniża stałą Michaelisa SIRT1 zarówno dla acetylowanego substratu, jak i NAD(+) oraz zwiększa przeżywalność komórek poprzez stymulowanie zależnej od SIRT1 deacetylacji  p53 . W drożdżach resweratrol naśladuje ograniczenie kalorii poprzez stymulację Sir2, zwiększając stabilność DNA i wydłużając żywotność o 70%. Omawiamy możliwe ewolucyjne początki tego zjawiska i proponujemy nowe kierunki badań nad terapeutycznym zastosowaniem aktywatorów sirtuin.

Związane ze starzeniem się fenotypy wydzielnicze ujawniają nieautonomiczne funkcje komórek onkogennego RAS i  supresora nowotworu p53   .

  • Starzenie się komórek hamuje  nowotwór  poprzez zatrzymanie proliferacji komórek, zasadniczo na stałe, w odpowiedzi na bodźce onkogenne, w tym stres genotoksyczny. Zmodyfikowaliśmy użycie macierzy przeciwciał, aby zapewnić ilościową ocenę czynników wydzielanych przez starzejące się komórki.
  • Pokazujemy, że  ludzkie  komórki indukowane do starzenia się przez stres genotoksyczny wydzielają niezliczone czynniki związane ze stanem zapalnym i złośliwością. Ten fenotyp sekrecyjny związany ze starzeniem się (SASP) rozwijał się powoli przez kilka dni i dopiero po uszkodzeniu DNA o wielkości wystarczającej do wywołania starzenia. Niezwykle podobne SASP rozwinęły się w normalnych fibroblastach, normalnych komórkach nabłonkowych i nabłonkowych   komórkach nowotworowych po stresie genotoksycznym w hodowli oraz w nabłonkowych  komórkach nowotworowych  in vivo po leczeniu  pacjentów z rakiem prostaty  chemioterapią uszkadzającą DNA.
  • W hodowanych przednowotworowych komórkach nabłonkowych SASP indukowały przejście nabłonkowo-mezenchymalne i inwazyjność, cechy charakterystyczne złośliwości, przez mechanizm parakrynny, który w dużej mierze zależał od czynników SASP, interleukiny (IL)-6 i IL-8. Co uderzające, dwie manipulacje znacznie wzmocniły i przyspieszyły rozwój SASP: onkogenna ekspresja RAS, która powoduje stres genotoksyczny i starzenie się w normalnych komórkach oraz funkcjonalna utrata  białka  supresorowego  nowotworu p53  .
  • Zarówno utrata  p53 , jak  i zysk onkogennego RAS również zaostrzyły propagujące parakrynne działania SASP. Nasze odkrycia określają główną cechę starzenia się wywołanego stresem genotoksycznym. Co więcej, sugerują nieautonomiczny mechanizm komórkowy, dzięki któremu  p53  może hamować, a onkogenny RAS może promować rozwój  raka związanego z wiekiem  poprzez zmianę mikrośrodowiska tkankowego.

Transaktywacja miR-34a przez  p53  szeroko wpływa na ekspresję genów i promuje apoptozę.

  1. Białko   supresorowe  nowotworu p53   jest krytycznym regulatorem odpowiedzi komórkowej na  inicjujące nowotwory objawy , takie jak stres genotoksyczny. W tym raporcie pokazujemy, że mikroRNA (miRNA) są ważnymi składnikami   sieci transkrypcyjnej p53 . Analizy globalnej ekspresji miRNA zidentyfikowały kohortę miRNA, które wykazują  zależną od p53 regulację w górę po uszkodzeniu DNA.
  2. Jeden taki miRNA, miR-34a, jest powszechnie usuwany w  ludzkich  nowotworach  i, jak pokazano tutaj, często nie występuje w komórkach  raka trzustki  . Charakterystyka pierwotnego transkryptu i promotora miR-34a pokazuje, że ten miRNA jest bezpośrednio transaktywowany przez  p53 . Ekspresja miR-34a powoduje dramatyczne przeprogramowanie ekspresji genów i sprzyja apoptozie.
  3. Podobnie jak znany zestaw  genów regulowanych przez p53 , geny reagujące na miR-34a są wysoce wzbogacone o te, które regulują progresję cyklu komórkowego, apoptozę, naprawę DNA i angiogenezę. Dlatego jest prawdopodobne, że ważną funkcją miR-34a jest modulacja i dostrajanie programu ekspresji genów zainicjowanego przez  p53 .

Aktywacja punktu kontrolnego uszkodzenia DNA i niestabilności genomowej w  ludzkich  zmianach przedrakowych.

  1. Geny punktów kontrolnych uszkodzenia DNA, takie jak  p53 , są często zmutowane w  ludzkim  raku , ale presja selekcyjna na ich inaktywację pozostaje nieuchwytna. Przeanalizowaliśmy panel  ludzkich przerostów płuc, z których wszystkie zachowały geny p53  typu  dzikiego  i nie wykazywały oznak ogólnej niestabilności chromosomowej, i znaleźliśmy oznaki odpowiedzi na uszkodzenie DNA, w tym fosforylację histonów H2AX i Chk2,  akumulację p53  , ogniskowe barwienie  p53 białko  wiążące   1 (53BP1) i apoptoza.
  2. Progresja do raka była związana z  inaktywacją p53  lub 53BP1 i zmniejszoną apoptozą. Odpowiedź na uszkodzenie DNA zaobserwowano również w znamionach dysplastycznych oraz w  ksenoprzeszczepach ludzkiej  skóry, w których hiperplazję indukowano przez nadekspresję czynników wzrostu. Zarówno płuca, jak i eksperymentalnie wywołane przerosty skóry wykazały brak równowagi allelicznej w loci, które są podatne na tworzenie pęknięć dwuniciowych DNA, gdy replikacja DNA jest zagrożona (powszechne kruche miejsca).

PKM2 Tumour Type M2 Pyruvate Kinase Mouse Recombinant Protein
PROTP52480 BosterBio Regular: 10ug 380.4 EUR

Recombinant Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase
7-04138 CHI Scientific 2µg Ask for price

Recombinant Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase
7-04139 CHI Scientific 10µg Ask for price

Recombinant Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase
7-04140 CHI Scientific 1mg Ask for price

Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase,TU M2PK ELISA Kit
201-12-2126 SunredBio 96 tests 528 EUR

Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase(TU M2PK)ELISA Kit
QY-E00187 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase,TU M2PK ELISA Kit
YLA0784HU-48T Shanghai YL Biotech 48T 435 EUR

Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase,TU M2PK ELISA Kit
YLA0784HU-96T Shanghai YL Biotech 96T 562.5 EUR

Recombinant (E. coli) Human Tumour Type M2 Pyruvate Kinase
RP-744 Alpha Diagnostics 10 ug 343.2 EUR

Kidney tumour with normal tissue array
KD2001 TissueArray each 474 EUR

Tumour Marker MUC1 (S1.1) , DNA Aptamer, unlabeled
AD-152-U Alpha Diagnostics Custom Ask for price

Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E01T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E01T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E01T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Tumour Marker MUC1 (S1.1) , DNA Aptamer, Biotinylated
AD-152-B Alpha Diagnostics Custom Ask for price

Tumour Marker MUC1 (S1.1) , DNA Aptamer, FITC labeled
AD-152-F Alpha Diagnostics Custom Ask for price

Human tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit
201-12-1821 SunredBio 96 tests 528 EUR

Human tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis(TWEAK)ELISA Kit
GA-E1837HM-48T GenAsia Biotech 48T 346.8 EUR

Human tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis(TWEAK)ELISA Kit
GA-E1837HM-96T GenAsia Biotech 96T 559.2 EUR

Human TWEAK(Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis) ELISA Kit
EH3931 FN Test 96T 628.92 EUR

Human tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis(TWEAK)ELISA Kit
QY-E00166 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit
YLA0497HU-48T Shanghai YL Biotech 48T 435 EUR

Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit
YLA0497HU-96T Shanghai YL Biotech 96T 562.5 EUR

Simian Tumour Necrosis Factor beta (TNFβ)ELISA Kit
QY-E110053 Qayee Biotechnology 96T 526.8 EUR

Simian Tumour Necrosis Factor alpha (TNFa)ELISA Kit
QY-E110082 Qayee Biotechnology 96T 526.8 EUR

Simian Tumour Necrosis Factor beta1 (TNFβ1)ELISA Kit
QY-E110042 Qayee Biotechnology 96T 526.8 EUR

Human p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
201-12-1712 SunredBio 96 tests 528 EUR

Human p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
CN-03353H1 ChemNorm 96T 520.8 EUR

Human p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
CN-03353H2 ChemNorm 48T 340.8 EUR

Human p53/tumor protein, p53/TP53 ELISA Kit
CSB-E08334h-24T Cusabio 1 plate of 24 wells 198 EUR

Human p53/tumor protein, p53/TP53 ELISA Kit
1-CSB-E08334h Cusabio
  • 964.80 EUR
  • 6118.80 EUR
  • 3244.80 EUR
  • 1 plate of 96 wells
  • 10 plates of 96 wells each
  • 5 plates of 96 wells each

Human p53/tumor protein(p53/TP53)ELISA Kit
GA-E1728HM-48T GenAsia Biotech 48T 346.8 EUR

Human p53/tumor protein(p53/TP53)ELISA Kit
GA-E1728HM-96T GenAsia Biotech 96T 559.2 EUR

Human p53/tumor protein(p53/TP53)ELISA Kit
QY-E04715 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Human p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
YLA0366HU-48T Shanghai YL Biotech 48T 435 EUR

Human p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
YLA0366HU-96T Shanghai YL Biotech 96T 562.5 EUR

ELISA kit for Human TWEAK (Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis)
E-EL-H2312 Elabscience Biotech 1 plate of 96 wells 640.8 EUR

ELISA kit for Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis (TWEAK)
KTE62915-48T Abbkine 48T 424.8 EUR

ELISA kit for Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis (TWEAK)
KTE62915-5platesof96wells Abbkine 5 plates of 96 wells 2702.4 EUR

ELISA kit for Human Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis (TWEAK)
KTE62915-96T Abbkine 96T 686.4 EUR

Rat Tumour Type M2 Pyruvate Kinase(TU M2PK)ELISA Kit
QY-E10439 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Mouse Tumour Type M2 Pyruvate Kinase(TU M2PK)ELISA Kit
QY-E21551 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Human Total P53(Tumor Protein p53) ELISA Kit
EH3898 FN Test 96T 628.92 EUR

Anti-Rat Tumour Antigens of Epithelial Origin antibody
STJ16100727 St John's Laboratory 100 µg 1164 EUR

Human p53/ tumor protein ELISA Kit
ELA-E0928h Lifescience Market 96 Tests 988.8 EUR

TWEAK ELISA Kit| Mouse Tumour Necrosis Factor Related Weak Induc
EF014055 Lifescience Market 96 Tests 826.8 EUR

TWEAK ELISA Kit| Rat Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer
EF018221 Lifescience Market 96 Tests 826.8 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) Protein
20-abx167824 Abbexa
  • 944.40 EUR
  • 360.00 EUR
  • 2983.20 EUR
  • 1128.00 EUR
  • 661.20 EUR
  • 100 ug
  • 10 ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 50 ug

Dog Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E08T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Dog Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E08T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Dog Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E08T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Rat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E02T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Rat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E02T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Rat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E02T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Pig Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E07T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Pig Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E07T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Pig Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E07T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Goat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E06T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Goat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E06T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Goat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E06T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Rabbit Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E04T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Rabbit Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E04T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Rabbit Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E04T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Mouse Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E03T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Mouse Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E03T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Mouse Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E03T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Monkey Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E09T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Monkey Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E09T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Monkey Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E09T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Rat TWEAK(Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis) ELISA Kit
ER1626 FN Test 96T 681.12 EUR

Rat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit
YLA0456RA-48T Shanghai YL Biotech 48T 465 EUR

Rat Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit
YLA0456RA-96T Shanghai YL Biotech 96T 600 EUR

Human Tumor Protein P53 (TP53) CLIA Kit
20-abx190149 Abbexa
  • 9493.20 EUR
  • 5058.00 EUR
  • 1167.60 EUR
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Human Tumor Protein p53 (TP53) CLIA Kit
abx197862-96tests Abbexa 96 tests 990 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53)CLIA Kit
SCA928Hu-10x96wellstestplate Cloud-Clone 10x96-wells test plate 6777.36 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53)CLIA Kit
SCA928Hu-1x48wellstestplate Cloud-Clone 1x48-wells test plate 663.31 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53)CLIA Kit
SCA928Hu-1x96wellstestplate Cloud-Clone 1x96-wells test plate 896.16 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53)CLIA Kit
SCA928Hu-5x96wellstestplate Cloud-Clone 5x96-wells test plate 3672.72 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) CLIA Kit
4-SCA928Hu Cloud-Clone
  • 6837.60 EUR
  • 3673.20 EUR
  • 896.40 EUR
  • 10 plates of 96 wells
  • 5 plates of 96 wells
  • 1 plate of 96 wells

Mouse TWEAK(Tumour Necrosis Factor Related Weak Inducer of Apoptosis) ELISA Kit
EM1618 FN Test 96T 681.12 EUR

Guinea pig Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E05T0556-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Guinea pig Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E05T0556-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Guinea pig Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis ELISA kit
E05T0556-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Mouse Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit
YLA1537MO-48T Shanghai YL Biotech 48T 465 EUR

Mouse Tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit
YLA1537MO-96T Shanghai YL Biotech 96T 600 EUR

Human Tumor Protein P53 (TP53) ELISA Kit
abx358652-96tests Abbexa 96 tests 848.4 EUR

Human Tumor Protein P53 (TP53) ELISA Kit
abx576270-96tests Abbexa 96 tests 848.4 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) ELISA Kit
DLR-TP53-Hu-48T DL Develop 48T 574.8 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) ELISA Kit
DLR-TP53-Hu-96T DL Develop 96T 745.2 EUR

Human Tumor Protein P53 (TP53) ELISA Kit
20-abx153409 Abbexa
  • 7970.40 EUR
  • 4250.40 EUR
  • 990.00 EUR
  • 10 × 96 tests
  • 5 × 96 tests
  • 96 tests

Human Tumor Protein P53 (TP53) ELISA kit
E01T0288-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Human Tumor Protein P53 (TP53) ELISA kit
E01T0288-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Human Tumor Protein P53 (TP53) ELISA kit
E01T0288-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Human Tumor Protein p53 ELISA Kit (TP53)
RK02430 Abclonal 96 Tests 625.2 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) ELISA Kit
RDR-TP53-Hu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 600 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) ELISA Kit
RDR-TP53-Hu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 830.4 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) ELISA Kit
RD-TP53-Hu-48Tests Reddot Biotech 48 Tests 573.6 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) ELISA Kit
RD-TP53-Hu-96Tests Reddot Biotech 96 Tests 794.4 EUR

Human Tumor Protein p53(TP53)ELISA Kit
QY-E00184 Qayee Biotechnology 96T 433.2 EUR

Human Tumor Protein p53 (TP53) ELISA Kit
SEA928Hu-10x96wellstestplate Cloud-Clone 10x96-wells test plate 5128.02 EUR
Proponujemy, że od najwcześniejszych etapów  rozwój raka  jest związany ze stresem replikacyjnym DNA, który prowadzi do pęknięć dwuniciowych DNA, niestabilności genomowej i presji selekcyjnej na   mutacje p53 
Tags: , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.