-
-
- W XXI wieku coraz więcej astronautów będzie przez dłuższy czas odwiedzać Międzynarodową Stację Kosmiczną (ISS). Dlatego niezwykle ważne jest dostarczenie niezbędnej podstawowej wiedzy na temat zagrożeń dla ich zdrowia i ich zdolności do pracy na stacji oraz podczas czynności poza pojazdem ( EVA ) w wolnej przestrzeni.
- Celem jednego z eksperymentów niemieckiego projektu TRIPLE-LUX (planowanego na ISS) jest oszacowanie zagrożenia zdrowia wynikającego z narażenia astronautów na promieniowanie w przestrzeni kosmicznej wewnątrz stacji, a także podczas czynności poza pojazdem na z jednej strony, a narażenie astronautów na nieuniknione lub dotychczas nieznane substancje genotoksyczne dla środowiska ISS z drugiej.
- Projekt (i) zapewni poszerzoną wiedzę na temat biologicznego działania promieniowania kosmicznego i enzymatycznej naprawy uszkodzeń DNA, (ii) odkryje komórkowe mechanizmy synergistycznego oddziaływania mikrograwitacji i promieniowania kosmicznego oraz (iii) zbada środowisko statków kosmicznych za pomocą wysoce specyficznych bioczujników .
- Do tych badań zostanie wykorzystany bioczujnik bakteryjny SOS-LUX-LAC-FLUORO-Toksyczność-test, łączący test SOS-LUX-opracowany w DLR Niemcy (patent) z dostępnym na rynku testem LAC-FLUORO. Test SOS-LUX obejmuje genetycznie zmodyfikowane bakterie transformowane plazmidem pPLS-1 pochodzącym z pBR322. Plazmid ten niesie pozbawiony promotora operon lux Photobacterium leiognathi jako element reporterowy pod kontrolą promotora SOS zależnego od uszkodzenia DNA z ColD jako elementu czujnikowego.
- System ten reaguje na promieniowanie i inne czynniki indukujące uszkodzenia DNA mierzalną emisją bioluminescencji transformowanych bakterii, zależną od dawki. Analogiczny test LAC-FLUORO został opracowany do wykrywania odpowiedzi komórkowych na cytotoksyny. Opiera się na konstytutywnej ekspresji białka zielonej fluorescencji (GFP) za pośrednictwem wektora ekspresji białka bakteryjnego pGFPuv (Clontech, Palo Alto, USA).
- W odpowiedzi na środki cytotoksyczne układ ten reaguje z zależną od dawki redukcją fluorescencji GFP. Obecnie opracowywany jest w pełni zautomatyzowany, zminiaturyzowany system sprzętowy do konfiguracji bakterii, który obejmuje pomiary luminescencji i fluorescencji lub absorpcji oraz ocenę opartą na analizie obrazu.
- Podczas pierwszej misji SOS-LUX-LAC-FLUORO-Toksyczność-Test na ISS, jako induktor genotoksyczny zostanie użyte znormalizowane źródło promieniowania, które nie zostało jeszcze ustalone. Panel rekombinowanych szczepów Salmonella typhimurium niosących plazmid SOS-LUX lub plazmid pośredniczący w fluorescencji lac-GFPuv zostanie użyty do równoległego określenia na jednej mikropłytce genotoksycznego i cytotoksycznego działania zastosowanego promieniowania w połączeniu z mikrograwitacją.
- Oprócz lub zamiast pomiarów fluorometrycznych środków cytotoksycznych, pomiary fotometryczne będą jednocześnie monitorować wzrost komórek, dając dodatkowe dane dotyczące przeżycia komórek. Uzyskane dane będą dostępne on-line w czasie trwania misji TRIPLE-LUX.
- Chociaż głównym celem misji TRIPLE-LUX jest pomiar efektu promieniowania w mikrograwitacji, test SOS-LUX-LAC-FLUORO-Toksyczność w zasadzie ma również zastosowanie jako biomonitor do wykrywania i pomiaru substancji genotoksycznych w powietrzu lub w systemie (recyklingu) wody na ISS lub ogólnie na ziemi.
Walidacja testu żywotności Clostridium endospore i analiza lodów Grenlandii i gleb pustyni Atacama.
- Mikroskopowy test żywotności przetrwalników (micro- EVA ) umożliwiający zliczenie kiełkujących przetrwalników Clostridium (GCE) w czasie krótszym niż 30 minut został zwalidowany i wykorzystany do określenia stężenia GCE w lodach Grenlandii i glebach pustyni Atacama . Inokulacja na agarozie domieszkowanej Tb(3+) i d-alaniną wyzwala kiełkowanie zarodników Clostridium i jednoczesne uwalnianie ~10(8) cząsteczek kwasu dipikolinowego (DPA) na endosporę, co pod wpływem impulsowego wzbudzenia UV umożliwia zliczenie powstałej zieleni Plamy luminescencyjne Tb(3+)-DPA jako GCE z mikroskopią luminescencyjną bramkowaną czasowo.
- Przebiegi intensywności w czasie plam luminescencyjnych były charakterystyczne dla dynamiki kiełkowania zarodników Clostridium stadium I. Mikro – EVA została zwalidowana względem tradycyjnej hodowli CFU w zakresie od 0 do 1000 całkowitych przetrwalników/ml (tj. ciałka o jasnej fazie/ml), uzyskując 56,4% ± 1,5% GCE i 43,0% ± 1,0% CFU. Pokazujemy również, że d-alanina służy jako środek kiełkujący specyficzny dla Clostridium (trzy przebadane gatunki), który hamuje kiełkowanie zarodników Bacillus (pięć przebadanych gatunków) w tym reżimie koncentracji przetrwalników.
- Ostatecznie, stężenia GCE w rdzeniach lodowych Grenlandii i glebach pustyni Atacama określono za pomocą mikro- EVA , uzyskując 1 do 2 GCE/ml lodu grenlandzkiego (w porównaniu z <1 CFU/ml po 6 miesiącach inkubacji) i 66 do 157 GCE/g Gleba pustyni Atakama (w porównaniu z 40 jtk/g gleby).
Analiza topnienia w wysokiej rozdzielczości w celu genotypu najczęstszych wariantów w HFE
- Analiza topienia amplikonów PCR w wysokiej rozdzielczości (HRM) została niedawno wprowadzona jako szybka i niedroga metoda genotypowania w zamkniętej probówce. W badaniu tym oceniono ten system jako opcję wykrywania trzech najczęstszych mutacji w genie HFE (C282Y, H63D, S65C), stanowiących główną postać dziedzicznej hemochromatozy.
- Użyto dziewięćdziesięciu próbek, wcześniej przebadanych przez bezpośrednie sekwencjonowanie i 27 kontroli. Analizę przeprowadzono na Rotor Gene Q, stosując komercyjną mieszankę HRM zawierającą barwnik Eva Green (Qiagen). Specyficzne startery umożliwiły amplifikację interesujących regionów w genie HFE. Po amplifikacji przeprowadzono analizę HRM w celu wykrycia wariantów DNA. Profile denaturacji termicznej próbek porównano z profilami kontrolnymi.
- Z łatwością zidentyfikowano sto procent próbek heterozygotycznych i homozygotycznych. Heterozygoty były łatwo identyfikowane, ponieważ heterodupleksy zmieniały kształt krzywych topnienia, ale istotne różnice były również obecne w krzywych topnienia homozygotycznych nosicieli w porównaniu z krzywymi typu dzikiego.
- Analiza HRM to atrakcyjna technologia do badań przesiewowych genów HFE. Jest to solidna technika, która może być szeroko stosowana w laboratoriach diagnostycznych w celu ułatwienia badań przesiewowych mutacji genów.
Szybka i niedroga identyfikacja płynów ustrojowych za pomocą opartej na profilowaniu RNA analizy multipleksowej o wysokiej rozdzielczości (HRM).
- Pozytywna identyfikacja charakteru materiału biologicznego znajdującego się na przedmiotach dowodowych może być kluczowa dla zrozumienia okoliczności towarzyszących przestępstwu. Jednak tradycyjne metody oparte na białkach nie pozwalają na identyfikację wszystkich płynów ustrojowych i tkanek, a zatem konieczne jest opracowanie strategii opartych na molekularnych metodach rozstrzygającej identyfikacji wszystkich płynów i tkanek istotnych z punktu widzenia medycyny sądowej.
- Profilowanie Messenger RNA (mRNA) jest przykładem takiego podejścia molekularnego. Obecne testy identyfikacji mRNA w płynach ustrojowych obejmują elektroforezę kapilarną (CE) lub ilościową platformę RT-PCR (qRT-PCR), każda z własnymi ograniczeniami. Obie platformy wymagają użycia drogich, znakowanych fluorescencyjnie starterów lub sond.
- Testy oparte na CE wymagają oddzielnych etapów amplifikacji i detekcji, co wydłuża czas analizy. W przypadku testów qRT-PCR w jednej reakcji można uwzględnić tylko 3-4 markery, ponieważ każdy z nich wymaga innego barwnika fluorescencyjnego.
- Aby uprościć testy profilowania mRNA oraz skrócić czas i koszty analizy, opracowaliśmy jedno- i wieloskładnikowe testy High Resolution Melt (HRM) płynów ustrojowych do identyfikacji powszechnie istotnych z punktu widzenia medycyny sądowej płynów i tkanek . Włączone biomarkery obejmują IL19 (wydzielina pochwowa), IL1F7 (skóra), ALAS2 (krew), MMP10 (krew menstruacyjna), HTN3 (ślina) i TGM4 (nasienie).
- Testy HRM wymagają jedynie nieznakowanych starterów PCR i jednego nasycającego interkalującego barwnika fluorescencyjnego ( Eva Green ). Każdy marker specyficzny dla płynu ustrojowego można łatwo zidentyfikować dzięki obecności wyraźnego piku topnienia. Zazwyczaj testy HRM są wykorzystywane do wykrywania wariantów lub izoform pojedynczego genu docelowego. Jednak opracowaliśmy unikatowe testy duplex i triplex HRM, aby umożliwić jednoczesne wykrywanie wielu celów na reakcję.
OPTIONAL GREEN FILTER (572NM)
GDBL-GREEN CORNING 1/pk 1052 EUR 2X Taq PCR Premix (5 x 1mL)
9K-002-0005 Bio Basic 5X1mL, 5ml 367.12 EUR 2X Pfu PCR Premix (5 x 1mL)
9K-002-0022 Bio Basic 5X1mL, 5ml 581.14 EUR dATP, 100mM, 1ml
2013A-1ML ACTGene 154 EUR dCTP, 100mM, 1ml
2013C-1ML ACTGene 154 EUR dGTP, 100mM, 1ml
2013G-1ML ACTGene 154 EUR dTTP, 100mM, 1ml
2013T-1ML ACTGene 154 EUR Creatinine Standard, 1ML
C003-1ML Arbor Assays 1ML 237 EUR Dissociation Reagent, 1ML
X017-1ML Arbor Assays 1ML 109 EUR NADPH Concentrate, 1ML
X043-1ML Arbor Assays 1ML 123 EUR Stop Solution, 1ML
X046-1ML Arbor Assays 1ML 65 EUR Dissociation Reagent, 1ML
X058-1ML Arbor Assays 1ML 73 EUR 2X High-Taq PCR Premix (5 x 1mL)
9K-002-0011 Bio Basic 5X1mL, 5ml 385.39 EUR dNTP MIX 100mM, 1ml
2013MIX-1ML ACTGene 154 EUR Urea Nitrogen Standard, 1ML
C089-1ML Arbor Assays 1ML 173 EUR Detection Reagent Concentrate, 1ML
X041-1ML Arbor Assays 1ML 143 EUR Enzyme Stabilization Buffer, 1ML
X091-1ML Arbor Assays 1ML 102 EUR Glutathione Reductase Conc., 10x, 1ML
X130-1ML Arbor Assays 1ML 123 EUR HBV LONGITUDINAL PANEL (13 X 1mL)
6502 Zeptometrix 13 X 1mL 1261.6 EUR HBV LONGITUDINAL PANEL (12 X 1mL)
6504 Zeptometrix 12 X 1mL 1261.6 EUR COOLCELL® FTS30, GREEN FREEZING CONTAINER, FOR 30 X 1ML OR 2ML CRYOGENIC VIALS
432008 CORNING 1/pk 485 EUR Empty Cartridges (1ml)
EB-Ctg1-5 ABTBeads 5/pk 146 EUR Reactive Green 5
GT6783-25G Glentham Life Sciences 25 g 126 EUR Reactive Green 5
GT6783-5G Glentham Life Sciences 5 g 54 EUR DetectX® Cortisone CLIA Conjugate Stock, 1ML
C056-1ML Arbor Assays 1ML 237 EUR 2X Taq PCR Premix with 0.5X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0006 Bio Basic 5X1mL, 5ml 367.12 EUR 2X Taq PCR Premix with 1.0X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0007 Bio Basic 5X1mL, 5ml 367.12 EUR 2X Taq PCR Premix with 1.5X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0008 Bio Basic 5X1mL, 5ml 367.12 EUR 2X Taq PCR Premix with 2.0X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0009 Bio Basic 5X1mL, 5ml 367.12 EUR 2X Pfu PCR Premix with 0.5X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0023 Bio Basic 5X1mL, 5ml 581.14 EUR 2X Pfu PCR Premix with 1.0X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0024 Bio Basic 5X1mL, 5ml 581.14 EUR 2X Pfu PCR Premix with 1.5X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0025 Bio Basic 5X1mL, 5ml 581.14 EUR 2X Pfu PCR Premix with 2.0X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0026 Bio Basic 5X1mL, 5ml 581.14 EUR COOLCELL® LX,. GREEN CELL FREEZING CONTAINER, FOR 12 X 1ML OR 2ML CRYOGENIC VIALS
432002 CORNING 1/pk 196 EUR dNTP set (each 100mM) (4 x 1mL)
9K-003-0007 Bio Basic 4x1mL, 4ml 605.35 EUR Syphilis Mixed Titer Panel (15 X 1mL)
KZMC002 Zeptometrix 15 X 1mL 659.44 EUR NATtrol EP Control (12 x 0.25 mL; 2 x 1mL)
NATEPC-NNS Zeptometrix 12 x 0.25 mL; 2 x 1mL 412.96 EUR NATtrol Respiratory Verification Panel (15 x 0.5mL; 2 x 1mL)
NATRVP-NNS Zeptometrix 15 x 0.5mL; 2 x 1mL 696.88 EUR 2X High-Taq PCR Premix with 1.0X Band Sharpener (5 x 1mL)
9K-002-0012 Bio Basic 5X1mL, 5ml 385.39 EUR Thiazole Green, 10, 000X in DMSO
40086-1mL Biotium 1mL 287 EUR SYBR Green I
B1747-5 Biovision 387 EUR X-gal
abx098142-1ml Abbexa 1 ml 398 EUR CytoSelect Clonogenic Tumor Cell Isolation Kit (5 x 5 preps)
CBA-155-5 Cell Biolabs 25 preps 3245 EUR 2X PCR Pre-Mix 3 (High-Taq) w/o Band Sharpener 5 x 1ml
9K-002-0013 Bio Basic 5X1mL, 5ml 385.39 EUR Eva QPCR SuperMix Kit
K5052200 Biochain 200 reactions 211 EUR Eva QPCR SuperMix Kit
K5052400 Biochain 400 reactions 320 EUR Serotonin / 5-Hydroxytryptamine (5-HT) Antibody
abx411600-1ml Abbexa 1 ml 439 EUR Mastoparan X
5-01515 CHI Scientific 4 x 1mg Ask for price 5-CR110-X, SE
90014 Biotium 5MG 534 EUR ELISA Grade Chick Type II Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
2011 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 296.5 EUR ELISA Grade Bovine Type II Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
2012 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 296.5 EUR ELISA Grade Porcine Type II Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
2013 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 296.5 EUR ELISA Grade Rat Type II Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
2014 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 354.5 EUR ELISA Grade Human Type II Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
2015 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 543 EUR ELISA Grade Mouse Type II Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
2016 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 746 EUR ELISA Grade Monkey Type II Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
2017 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 361.75 EUR ELISA Grade Bovine Type I Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
1002 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 176.15 EUR ELISA Grade Human Type I Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
1005 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 456 EUR ELISA Grade Mouse Type I Collagen, 0.5 mg/ml x 1ml
1006 Chondrex 0.5 mg/ml x 1 ml 216.75 EUR 5-Hydroxymethyluridine Antibody
abx022522-1ml Abbexa 1 ml 1435 EUR PAX-5 Antibody
P1033-1ml SAB 1ml 745 EUR DiagNano Green Fluorescent Silica Particles, 5 μm
DNG-L034 Creative Diagnostics 10 mL 627 EUR COLLECTION CONTAINER 1L, EVA FILM
91-200-01 CORNING 1/pk 80 EUR COLLECTION CONTAINER 2L, EVA FILM
91-200-02 CORNING 1/pk 88 EUR COLLECTION CONTAINER 5L, EVA FILM
91-200-05 CORNING 1/pk 99 EUR COLLECTION CONTAINER 10L, EVA FILM
91-200-10 CORNING 1/pk 101 EUR COLLECTION CONTAINER 20L, EVA FILM
91-200-20 CORNING 1/pk 110 EUR COLLECTION CONTAINER 10L, EVA FILM
91-200-36 CORNING 1/pk 86 EUR COLLECTION CONTAINER 20L, EVA FILM
91-200-39 CORNING 1/pk 89 EUR COLLECTION CONTAINER 1L, EVA FILM
91-200-42 CORNING 1/pk 73 EUR COLLECTION CONTAINER 5L, EVA FILM
91-200-43 CORNING 1/pk 151 EUR COLLECTION CONTAINER 10L, EVA FILM
91-200-45 CORNING 1/pk 126 EUR COLLECTION CONTAINER 20L, EVA FILM
91-200-47 CORNING 1/pk 132 EUR COLLECTION CONTAINER 50L, EVA FILM
91-200-48 CORNING 1/pk 146 EUR COLLECTION CONTAINER 100L, EVA FILM
91-200-82 CORNING 1/pk 279 EUR COLLECTION CONTAINER 200L, EVA FILM
91-200-83 CORNING 1/pk 292 EUR Power Eva QPCR SuperMix Kit
K5057200 Biochain 200 reactions 188 EUR Power Eva QPCR SuperMix Kit
K5057400 Biochain 400 reactions 320 EUR MICRO CENTRIFUGE TUBE, AMBER, 5 ML, 250/1250
MCT-500-X CORNING 250/pk 190 EUR Kodak X-Ray Film 5 x 7 inch
B502 ABM 100 Sheets 108 EUR 7077B PIPET SHRTY 1ML
7077B-1 CORNING 250/pk 231 EUR 7078B PIPET SHRTY 1ML
7078B-1 CORNING 250/pk 240 EUR GFP-nAb Agarose 1ml
ABP-NAB-GFPA100 Allele Biotech 1 ml Ask for price GFP-nAb Magnetic 1ml
ABP-NAB-GFPM100 Allele Biotech 1 ml Ask for price mTFP-nAb Agarose 1ml
ABP-NAB-MTFPA100 Allele Biotech 1 ml Ask for price RFP-nAb Agarose 1ml
ABP-NAB-RFPA100 Allele Biotech 1 ml Ask for price RFP-nAb Magnetic 1ml
ABP-NAB-RFPM100 Allele Biotech 1 ml Ask for price X-press Tag Peptide
A6010-5 ApexBio 5 mg 168 EUR DiagNano Green Fluorescent, Amine Silica Particles, 5 μm
DNG-L071 Creative Diagnostics 10 mL 679 EUR DiagNano Green Fluorescent, Carboxyl Silica Particles, 5 μm
DNG-L111 Creative Diagnostics 10 mL 684 EUR OxiSelect Intracellular ROS Assay Kit (Green Fluorescence)
STA-342-5 Cell Biolabs 5 x 96 assays 2549 EUR CytoSelect 96-Well Hematopoietic Colony Forming Cell Assay (5 x 96 assays)
CBA-320-5 Cell Biolabs 5 x 96 assays 2114 EUR COLLECTION CONTAINER 500 ML, EVA FILM
91-200-41 CORNING 1/pk 69 EUR 5-carboxy-x-rhodamine, se (5-rox, se)
90036 Biotium 5MG 230 EUR COOLCELL® FTS30 FREEZING CONTAINER, FOR 30 X 1ML OR 2ML CRYOGENIC VIALS
432007 CORNING 1/pk 485 EUR 5-(and-6)-Carboxyrhodamine 110-X, hydrochloride (5(6)-CR 110-X):5mg
90001 Biotium 5MG 283 EUR 5-(and-6)-Carboxyrhodamine 110-X, hydrochloride (5(6)-CR 110-X):5mg
90002 Biotium 5MG 217 EUR Malachite green
AT060 Unibiotest 1mg 1790 EUR Leucomalachite green
AT105 Unibiotest 1mg 1368 EUR Brilliant green
BB0242 Bio Basic 25g 56.09 EUR W tym miejscu opisujemy rozwój i wstępną ocenę wydajności opracowanych testów HRM. Wyniki pokazują potencjalne zastosowanie testów HRM do szybkiego i stosunkowo niedrogiego badania przesiewowego dowodów biologicznych.
-